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蒺藜(Tritulus terrestris L.)广布于全球温带,其果实也是一种常用中药,药用历史悠久。20世纪60年代以来,国内外学者对蒺藜属植物化学成分及其活性进行了大量研究,截至目前,从蒺藜属中已分离得到128种甾体皂苷及皂苷元。为了更好的开发和利用蒺藜,本文应用UPLC/Q-TOF MSE技术对不同产地蒺藜药材进行定性及相对定量分析,继而在液质分析指导下对北京、内蒙产蒺藜全草的甾体皂苷进行分离纯化及结构鉴定。 1.应用UPLC/Q-TOF MSe技术和Markerlynx软件对11个以新疆为主不同产地的蒺藜全草及16个蒺藜果实的化学成分进行了分析,研究表明,各产地全草比较中,新疆两个产区(昌吉、伊犁)的成分较为一致,但与内蒙、北京产蒺藜之间存在差异,主要为同分异构体的种类及含量;果实比较中,各产地间差异较小。进而对各果实样品进行了相对定量分析,各样品中化合物均以替告皂苷元类和海柯皂苷元类为主。 2.在UPLC/Q-TOF MSE技术指导下对北京、内蒙产蒺藜中甾体皂苷类成分进行分离鉴定。 以主产区北京、内蒙产蒺藜为原材料,70%乙醇提取,采用硅胶柱层析、SP825大孔吸附树脂柱层析、M C I柱层析、开放C18柱层析、PHPLC等色谱分离技术,共分离得到25个单体化合物。根据理化性质,HR-ESI-MS、1D和2D N M R(1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、TOCSY、N O E S Y)等波谱分析方法,鉴定了其中的24个单体化合物的结构,包括21个呋甾烷型甾体皂苷和3个螺甾烷型甾体皂苷,其中12个化合物为新化合物(11个呋甾和1个螺甾皂苷)。 新化合物的结构分别为:26-O-Ad-吡喃葡萄糖基-(20X25尺)-5a-呋甾-22(23)-烯-3及20a,26-三醇-3-O-A d-吡喃木糖基-(142)-[^d-吡喃木糖基-(143)]-y9-D-吡喃葡萄糖基-(1^4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(142)]-y9-D-吡喃半乳糖苷(1),26-O-Ad-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋-20,22-二酮-3-O-p-D-吡喃木糖基-(丨―?)-…^-卩比喃木糖基-(1—3)]-p-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-yP-D-吡喃半乳糖苷(2),26-O-yP-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-7(8)-烯-3p,22a,26-三醇-3-O-P-D-卩比喃木糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-p-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-P-d-吡喃半乳糖苷(3),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-5(6)-烯-3p,22a,26-三醇-3-O-P-D-吡喃木糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-yP-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-P-D-吡喃半乳糖苷⑷,26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(255)-5a-呋甾-12-酮-3p,22a,26-三醇-3-O-P-D-吡喃木糖基-(1—2)-[P-d-吡喃木糖基-(1—3)]-P-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-yP-D-吡喃半乳糖苷(5),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-12-酮-3yP,22a,26-三醇-3-O-yP-D-吡喃木糖基-(1—2)-[P-d-吡喃木糖基-(1—3)]-P-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-P-D-吡喃半乳糖苷(6),24-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(255)-5a-螺甾-3yP,24yP-二醇-3-O-yP-D-吡喃木糖基-(1—2)-[P-d-吡喃木糖基-(1—3)]-P-d-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-P-D-吡喃半乳糖苷(7),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(2025R)-5a-呋甾-22(23)-烯-3^20^26-三醇-3-O-P-D-吡喃半乳糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-O-yP-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-yP-D-吡喃半乳糖苷(9),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(2025R)-5a-呋甾-22(23)-烯-3^20^26-三醇-3-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-O-yP-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-yP-D-吡喃半乳糖苷(10),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-20(22)-烯-3p,26-二醇-3-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-O-yP-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-yP-D-吡喃半乳糖苷(11),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-5(6),20(22)-二烯-3p,26-二醇-3-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(1—2)-[P-D-吡喃木糖基-(1—3)]-O-yP-D-吡喃葡萄糖基-(1—4)-yP-D-吡喃半乳糖苷(12),26-O-P-D-吡喃葡萄糖基-(25R)-5a-呋甾-4(5),20(22)-二烯-3,12-二酮(13)。 此外还包括3个首次以单体形式分离得到的化合物:(25R)-5a-螺甾-12-酮-3p-醇-3-O-P-D-吡喃木糖基-(1—2)-[P-d-吡喃木糖基-(1—3)]-P-d-吡喃葡萄糖基-(1—4)-[a-L-吡喃鼠李糖基-(1—2)]-P-d-吡喃半乳糖苷(8),25S-terrestrosin I(19)和25R-terrestrosin I(20)。2个首次从蒺藜中分离得到的呋甾皂苷:Parvispinoside A(21)和Parvispinoside B(23)。 本论文分离鉴定的甾体皂苷包括一些比较新颖的母核,如在蒺藜中未见报道的C20-OH、A22(23)的母核类型(化合物1、9、10);自然界少见的A7(8)结构的化合物(化合物3);少见的含20、22位酮基化合物(化合物2)和24位连糖基的螺甾皂苷(化合物7)。这些化合物丰富了蒺藜中甾体皂苷的结构类型,为蒺藜中甾体皂苷的液质表征及快速结构鉴定提供依据,为明确蒺藜化学成分组成与活性关系、进一步开发利用蒺藜药材奠定了基础。