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目的1.探讨小鼠在遭受急性神经毒素损害时,预防接种优化hα-syn核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B对小鼠中脑黑质部多巴胺能神经元的神经保护作用。2.观察小鼠在遭受急性神经毒素损害时,预防接种优化hα-syn核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B对多巴胺能神经元COX-2和iNOS表达的影响。方法用去内毒素质粒大量抽提试剂盒大量抽提质粒和空载体,制备hα-syn核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B质粒、pVAX1空载体。在C57BL小鼠双侧后肢胫骨前肌同一部位、同一深度地分别预防注射pVAX1-IL-4/SYN-B质粒(优化核酸疫苗组)、pVAX1空载体(空载体组)或PBS(PBS组)各50μl,共3次。末次注射2周后,各组小鼠均经腹腔注射MPTP(20mg/kg),间隔2h注射1次,共4次。在免疫接种与模型制备过程中,观察小鼠行为学变化,评价模型是否制备成功。于末次MPTP注射后1、3、7d处死小鼠(n=6)。采用HE染色法和DAB免疫组织化学法观察黑质部多巴胺能神经元形态的改变和COX-2、CD11b、iNOS阳性神经元数目的表达情况;采用RT-PCR法检测不同时间点小鼠中脑黑质COX-2和iNOS的mRNA表达变化。结果1.行为学观察结果:在免疫接种过程中,各组小鼠于预防注射pVAX1-IL-4/SYN-B质粒、pVAX1空载体和PBS前后其行为学均无明显变化。在模型制备过程中,优化核酸疫苗组第1次注射MPTP 10~30 min后,小鼠均出现震颤抖动、少动、竖毛、蜷缩、分泌物明显增多、烦躁等症状。第2次注射后,症状加重,并且易激惹。第3次注射后症状进一步加重。第4次注射10min后,出现尾巴成弓形隆起、僵硬、细颤、活动变慢、前后肢运动协调性差等类PD样症状。空载体组和PBS组于每次注射MPTP后也出现上述类似症状,各组行为学表现均符合急性PD小鼠模型标准。2.形态学观察结果:HE染色法染色后,优化核酸疫苗组与空载体组和PBS组相比,黑质部残存神经元数目较多,小胶质细胞的激活较轻。3. SP免疫组化法结果显示:与空载体组和PBS组相比,优化核酸疫苗组小鼠中脑黑质部TH阳性神经元平均积分光密度值MOD较大(0.39±0.10)TH阳性细胞染色较深,有显著差异性(p<0.05);CD11b、COX-2和iNOS阳性神经元数目相对较少,平均积分光密度值MOD较小,阳性细胞染色较浅,差异有统计学意义(p<0.05)。后两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4. RT-PCR结果显示:在MPTP末次注射后1、3、7d,COX-2在各组均有表达,1d表达量微弱,3d表达量达高峰,7d各组表达均降低。同一时间点,优化核酸疫苗组与空载体组和PBS组相比显著降低,差异有统计学意义(P<0.01),;iNOS在各组也均有表达,且在1d时表达最高,随着时间的推移,表达量依次降低。同一时间点,优化核酸疫苗组与空载体组和PBS组相比有所降低,差异具有统计学意义(P<0.01)。后两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论1.优化核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B具有较好的免疫原性,诱导产生的抗体能对抗MPTP神经毒素的脑损害;在预防接种小鼠后产生的免疫效果对多巴胺能神经元具有神经保护作用。2.优化核酸疫苗pVAX1-IL-4/SYN-B具有较好的对抗炎症因子表达作用,能够在一定程度上保护多巴胺能神经元免于炎症反应对其所造成的损害。