前体淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴母细胞白血病发生细胞的研究

来源 :中国协和医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nanermama
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目的:通过急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat,探讨分离鉴定白血病干细胞的方法;初步探讨分离及鉴定原代前体淋巴母细胞淋巴瘤/急性淋巴细胞白血病干细胞的方法。 方法:流式细胞分析方法,检测Jurkat细胞的分子表型:应用CD34免疫磁珠分选CD34+细胞;单克隆培养方法获得CD34-细胞;RT-PCR法分别对CD34+和CD34-单克隆细胞检测CD34基因和肿瘤干细胞相关基因的表达;体外软琼脂克隆和SCID小鼠体内成瘤实验,检测CD34+和CD34-细胞的克隆形成和致瘤能力;流式细胞分选方法,对原代急性淋巴细胞白血病中不同分子表型细胞进行分选及RT-PCR法检测急性淋巴细胞白血病中常见的染色体异位。 结果:Jurkat的细胞表型均符合分化的T淋巴细胞特点;在Jurkat细胞群中可以分出CD34+CD38+CD7+和CD34-CD38+CD7+两群分化程度不同的细胞;体外培养和SCID小鼠体内致瘤实验显示CD34+细胞可通过CD34表达逐渐减弱的方式向CD34-细胞分化,而这一分化过程是不可逆的;CD34+和CD34-克隆细胞在造血干细胞相关基因Wntl,Bmil,Lefl,ABCG2和端粒酶逆转录酶基因的表达上没有差异;CD34+和CD34-细胞均可在体外无限增殖,形成单克隆细胞株,软琼脂克隆形成能力无显著差别;CD34+和CD34-细胞在SCID小鼠体内的致瘤能力无差异。 结论:磁珠细胞分选方法可以有效分选阳性表达细胞;Jurkat细胞系中的所有细胞均具有T细胞免疫表型,提示Jurkat细胞系的肿瘤发生细胞应为已定向分化的表型为CD34+CD38+CD7+的T淋巴细胞祖细胞,而非造血干细胞;在Jurkat细胞系中一部分CD34+细胞向CD34-细胞分化,而另一部分则维持CD34的表达,这提示Jurkat中的CD34+细胞具有干细胞特点,即存在自我复制、有限分化和无限增殖的能力,但并不意味着其下游分化的CD34-细胞不具有无限增殖能力和致瘤能力。CD34+向CD34-细胞的转化是一个CD34的表达逐渐减弱的过程。Jurkat细胞系可以成为研究CD34基因表达调控和淋巴细胞白血病干细胞自我复制能力的有效模型。
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