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本研究以海南、福建两省沿海虾蟹养殖场采集的土样为供试材料,采用平板透明圈法筛选出8株具有明显水解几丁质能力的菌株。通过DNS法测定酶活,复筛得到SG05,SG07,SG12,SG19四株菌株,酶活较高而且稳定。通过薄层色谱与高效液相色谱分析,发现SG05菌株能降解几丁质为3~5聚合度不等的几丁寡糖。
对SG05菌株的发酵条件进行优化,确定产几丁质酶发酵培养基的最佳组成是:K2HPO40.07%,KH2PO40.03%,MgSO4·7H2O0.05%,FeSO4·7H2O0.002%,胶体几丁质0.2%(干重),NaCl0.3%,酵母膏0.2%,pH6.5。最佳的发酵条件为:80mL/250mL三角瓶中接种培养24h的种子液5%,在30℃,180rpm发酵48h后酶活力可达0.85U/mL。该几丁质酶是一种诱导型的胞外酶。
对SG05菌株几丁质酶粗酶液的性质进行了研究。其最适温度为36℃,最适pH为6.0,酶在48℃以上易失活,但在pH5.0~7.0的环境中比较稳定。
经16srDNA序列分析、形态和生理生化鉴定,初步确定SG05菌株为Bacillussp.。