本试验旨在建立准确、快速的检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的特异性引物和Taqman探针,构建标准阳性质粒模板,优化了多重实时荧光定量PCR反应体系和条件,并将标准阳性质粒10倍倍比稀释作多重实时荧光定量PCR标准曲线,评价多重实时荧光定量PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性,建立了鉴别牛羊种布鲁菌的实时荧光定量PCR方法,并用此方法对临床样品进行检测。结果显示：引物浓度400nM,探针浓度200nM,退火温度60℃为所建立多重实时荧光定量PCR的最佳反应体系和条件。此诊断方法可以特异地检测布鲁菌、牛布鲁菌、羊布鲁菌,不与其它革兰氏阴性细菌发生交叉反应,特别是与布鲁菌有强烈交叉反应的小肠结肠炎耶尔森菌O：9,表明其具有良好的特异性。另外,此诊断方法Cq值的变异系数均小于0.05,检测限为2.8fg～3.2fg,表明其具有良好的可靠性、稳定性及较高的敏感性。运用已建立的诊断方法对临床样品进行检测,其可以准确、快速的检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌。