第一部分目的:本实验拟通过体外细胞培养的方法，将间充质干细胞自骨髓血中分离出来，并加以纯化、鉴定，进一步在体外的培养条件下研究其增殖及生长的特性，从而探讨为组织工程化血管研究提供种子细胞的可能性。 方法:收集成人骨髓血，采用密度梯度离心和贴壁生长的方式，提取单个核细胞进行体外培养；收集第2～3代细胞行流式细胞仪检测细胞抗原表达；采用细胞计数的方法，绘制原代培养和传代培养细胞的生长曲线。 结果:通过密度梯度离心和贴壁生长的方法，可以获取具有一定形态特点、贴壁生长、增殖活跃的骨髓间充质干细胞；该细胞表达CD105，但不表达CD34、CD45等；原代培养曲线显示，第2～6d为生长潜伏期，第7～8d开始，贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆，第8～10d进入对数增长期；第12～14d进入个平台期；传代培养的细胞多于P10后开始出现衰老的现象，传代培养的潜伏期为24～48h，传代培养的对数增长期为4～6d，接种后8～9d，细胞的增殖、生长逐渐缓慢，进入平台期。 结论: 1.利用密度梯度离心和贴壁的方法可以获取较高纯度的BMMSCs； 2.该BMMSCs具有大量增殖的功能，可满足组织工程种子细胞的需要； 3.BMMSCs表达CD105，不表达CD34、CD45。 第二部分目的：本实验通过诱导入骨髓间充质干细胞向软骨样细胞和成纤维样细胞的分化，通过形态学和分子生物学的鉴定，探讨其作为组织工程化气管管壁种子细胞的可行性。 方法：取第2～4代生长状态良好的BMMSCs细胞，用含5ng/mlTGF-β1的α-MEM(15％FBS)培养液诱导、分化为软骨细胞；用含2ng/mlFbGF和5ng/mlTGF-β1的IMDM(15％FBS)培养液诱导、分化为成纤维细胞；对所诱导、分化的细胞进行形态学观察和分子生物学等鉴定。 结果：BMMSCs在含5ng/mlTGF-β1的α-MEM(15％FBS)培养液中诱导8天后，细胞变大，为多角形或不规则样，甲苯胺蓝染色见胞浆及细胞周围有紫红色异染出现，RT-PCR电泳见诱导2d、4d、8d的细胞均表达COL-ⅡmRNA，2d组表达稍弱，4d组和8d组表达强度无显著差异；BMMSCs在含2ng/mlFbGF和5ng/mlTGF-β1的IMDM(15％FBS)培养液中诱导8天后，细胞呈长梭形，细胞排列非常紧密，并且有重叠，电镜下可见细胞。 结论： 1.骨髓间充质干细胞可以在体外定向转分化为具有软骨细胞特性的细胞； 2.骨髓间充质干细胞可以在体外定向分化为成纤维细胞样的细胞，但仍需进一步鉴定； 3.所诱导的细胞可作为组织工程的种子细胞。