PCR和LAMP检测阴道毛滴虫的研究

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目的:  探讨PCR法对酚氯仿法和煮沸法提取的阴道毛滴虫DNA的检测率,比较LAMP和PCR法对阴道毛滴虫检出率的差异。  方法:  收集临床妇科门诊阴道毛滴虫湿片直接镜检法为阳性的阴道分泌物标本72例,健康体检的女性的阴道分泌物标本30例,平均分成两份,分别用酚氯仿法和煮沸法提取DNA,根据NCBI基因库中阴道毛滴虫标准株的基因序列,合成3对特异性引物。将提取的DNA标本用这3对引物分别进行PCR反应,比较这两种方法提取DNA对阴道毛滴虫检出率的差异。针对阴道毛滴虫基因中高度重复的2000 bp的DNA片段,合成6对引物,用LAMP法检测阴道毛滴虫,并比较LAMP法和PCR法对阴道毛滴虫检出率的差异。  结果:  阴道毛滴虫通过酚氯仿法和煮沸法提取DNA,用核酸蛋白分析仪测其浓度及吸光度A260和A280的比值,均在实验正确范围内。以两种方法提取的DNA为模板,均扩增出了3条特异性片段,其大小分别为300 bp,120 bp和312bp。酚氯仿法法与煮沸法提取的DNA对阴道毛滴虫的检出率无显著性差异(P>0.05)。LAMP法对阳性阴道毛滴虫进行体外扩增,用琼脂糖凝胶电泳可出现阶梯状条带,加入荧光染料SYBR Green后,可在紫外灯下观察到荧光。LAMP法对阴道毛滴虫的检出率与PCR法相比有显著性差异(P<0.05),LAMP法检出率高于PCR法。  结论:  PCR法检测酚氯仿法和煮沸法提取的阴道毛滴虫DNA之间无显著性差异。LAMP法对阴道毛滴虫的检测优于PCR法。LAMP法仪器设备简单,耗时短,操作方便,敏感性高,可用于临床对阴道毛滴虫的快速检测。
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