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血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A,SAA)是一类血清蛋白家族的统称,在各种动物组织中高度保守。成熟的SAA蛋白质大小为12~14 kD,一级结构由103~104个氨基酸序列组成,不同的SAA二级结构有不同的寡聚状态。SAA与疾病高度相关,参与很多疾病的致病性,在免疫中也有重要作用。研究表明,SAA对许多革兰氏阴性菌具有抑制作用,但对真菌的抑制作用尚不得知。因此,探究SAA对真菌的抑制功能,将为SAA的抑菌机制的研究或者新的抑菌机制的提出奠定良好的基础,同时也为新药研发提供理论指导。本研究以重组人SAA1蛋白为研究对象,原核表达带有His标签的SAA1蛋白,过镍柱获得纯化蛋白。同时探索了SAA1蛋白对白色念珠菌SC5314的抑菌效果。主要研究过程及结果如下。1.重组质粒的构建:克隆人SAA1三亚型基因,将其与载体pET-28a连接,获得重组载体。2.目的蛋白的诱导、纯化与鉴定。将重组载体转化到KS1000、BL21(DE3)、Rosetta(DE3)、Rosetta gami2(DE3)四种宿主表达菌中,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检验诱导表达前后蛋白。结果发现SAA1蛋白在在BL21(DE3)中表达量最高,因此选用BL21(DE3)作为表达宿主菌。利用BL21分别诱导表达SAA1-α、SAA1-β、SAA1-γ三种蛋白。菌体破碎,抽提蛋白,过镍柱纯化,获得纯度较高的三种蛋白。通过SDS-PAGE进行纯度分析,Western Blot进行活性鉴定,确认纯化后的蛋白是目的蛋白,且纯度较高。3.探究SAA1的抑菌作用。将纯化后SAA1三亚型进行浓度梯度稀释,将培养至对数期的白色念珠菌SC5314与SAA1共培养,涂板、统计菌落数。结果发现SAA1三亚型蛋白在一定范围内,随着浓度的增加,白色念珠菌SC5314菌落数逐渐减少。表明SAA1三亚型蛋白对白色念珠菌SC5314均有抑制作用,且表现出不同的抑菌效果。在一定范围内其抑菌效果与浓度呈正相关关系。本研究原核表达了SAA1蛋白的三种亚型,并研究了其对白色念珠菌的抑制作用,获得了抑菌效果较好的蛋白亚型,为SAA1蛋白的应用提供了较好的前期基础。