细胞内外环境中凝溶胶蛋白水平对中性粒细胞趋化功能的影响

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第一部分目的:研究凝溶胶蛋白(Gelsolin, GSN)自身对大鼠离体多形核嗜中性粒细胞(Polymorphonuclear neutrophil, PMN)是否具有趋化作用。方法:成年SD大鼠,麻醉后采集静脉血液标本,采用Ficoll密度梯度离心、葡聚糖沉降、红细胞裂解法分离PMN。在Transwell细胞培养系统中进行趋化实验。PMN接种于上室,在下室培养基中加入重组凝溶胶蛋白,观察趋化至下室的PMN数量并计算趋化指数,研究凝溶胶蛋白自身对PMN是否具有趋化功能。结果:在Transwell细胞培养系统下室加入凝溶胶蛋白,趋化至下室的PMN数量和趋化指数均没有明显改变(P>0.05)。结论:凝溶胶蛋白本身对大鼠离体PMN没有趋化作用。第二部分目的:研究细胞外环境凝溶胶蛋白水平变化对趋化肽fMLP (N-formylmethionyl-leucyl-phenylalanine)诱导的PMN趋化功能的影响。方法:成年SD大鼠,麻醉后采集静脉血。采用Ficoll密度梯度离心、葡聚糖沉降、红细胞裂解法分离PMN。在Transwell细胞培养系统中进行趋化实验,PMN接种于上室并在上室培养基中加入重组凝溶胶蛋白,下室培养基中加入fMLP,观察趋化至下室的PMN数量并计算趋化指数,研究细胞外凝溶胶蛋白水平改变对fMLP诱导的PMN趋化功能的影响。结果:在Transwell细胞培养系统上室加入凝溶胶蛋白,趋化至下室的PMN数量和趋化指数均没有明显改变P>0.05)。结论:细胞外环境中凝溶胶蛋白水平改变,不影响fMLP诱导的PMN趋化能力。第三部分目的:研究细胞内凝溶胶蛋白水平变化对趋化肽fMLP诱导的PMN趋化功能的影响。方法:成年SD大鼠,麻醉后采集静脉血液标本,采用Ficoll密度梯度离心、葡聚糖沉降、红细胞裂解法分离PMN。采用电穿孔法向PMN中分别转入凝溶胶蛋白或其抗体。在Transwell细胞培养系统进行fMLP诱导趋化实验,观察趋化至下室的PMN数量并计算趋化指数,研究细胞内凝溶胶蛋白水平改变对fMLP诱导的PMN趋化功能的影响。结果:向PMN中转入凝溶胶蛋白,趋化至下室的PMN数量和趋化指数均没有明显改变(P>0.05);但向PMN-中转入凝溶胶蛋白抗体,趋化至下室的PMN数量减少,趋化指数降低(P<0.05)。结论:向细胞内导入外源性凝溶胶蛋白不影响fMLP诱导的PMN趋化能力,但向细胞内导入凝溶胶蛋白抗体可明显抑制fMLP诱导的PMN趋化功能。
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