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以紫杉醇为代表的紫杉烷二萜是一类新型有效的天然抗肿瘤药物,药源匮乏,价格昂贵.以真菌取代红豆杉植物,通过微生物发酵工程途径获得紫杉醇,是扩大药源的一个具有潜力的方向.本篇论文,首次系统地针对南中国所特有的红豆杉属变种植物——南方红豆杉,开展内生真菌的筛选发掘和产紫杉醇的研究.目的在于利用国内丰富的生物种质资源探寻紫杉醇的新药源途径,获得有效分泌紫杉烷物质的目标新菌株,同时利用真菌在培养、调控和改造方面的便利性,为研究解决困扰紫杉醇规模产出的一些关键问题并最终通过微生物工程途径生产该药物奠定基础.以20~100a以上生树龄、胸径0.65~1.95m的南方红豆杉为分离材料,截取树皮、形成层、树叶、叶芽、种子胚、木质部等不同部位组织,以丝状真菌为分离目标,经过先后6个批次的分离纯化,获得289株单一菌种,实验菌株109个(其中丝状真菌105个,放线菌4个).从外皮、韧皮部和木质部得到的菌种数比例约为3:2:1.首批选取20个菌株,经过摇瓶培养和静止培养,再用二氯甲烷萃取抽提培养液,获得20个萃取产物.以丝状真菌分类鉴定法研究了目标菌株的形态结构,鉴定结果,1611-E和2212-C分别为无色丛梗孢的轮柄梳霉型和头孢霉型,主要行无性分生孢子式繁殖;2222-D为无孢菌群,具有特化的珊瑚状束式须根,以菌丝机制生长繁殖.这些有同一化产物但无亲缘关系的真菌,表明红豆杉内生真菌的存在并同宿主一样具有产紫杉烷的能力,可能是一种普遍现象.同步研究了1611-C、2212-C、2222-B、2222-D、2611、3121-A和3221-C等7株真菌的胞外粗提产物对肝癌细胞BEL-7402的体外细胞毒效应,并根据MTT比色分析法及倒置显微镜下的细胞形态以评价不同浓度药物对癌细胞株所起的细胞毒作用效果.通过基础培养基中添加调节因子,研究了2222-D菌株的合成代谢生理.结果表明,在培养中添加前体物质(乙酸钠、苯丙氨酸及其组合)、同代谢途径产物(棉酚)、生物调节因子(菜籽饼、红豆杉枝叶、内生真菌、外源真菌)和异构低聚糖等多类型物质,除异构低聚糖的表现不太明显外,其余均能对紫杉醇产物起到正向促进影响.其中用乙酸钠和苯丙氨酸组合添加可以使紫杉醇产出量达到最高246.36μg/L,而棉酚和真菌类调节因子的合适量的添加也是培养中的较好选择手段.