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[目的]研究巴氏蘑菇多糖(Agaricus blazei Murrill polysaccharide,ABPS)对 TLR4受体信号转导通路的影响,探讨巴氏蘑菇多糖的免疫调节机制。[方法](1)15.6 μg/mL、31.2 μg/mL、62.5 μg/mL、250 μg/mL、125 μg/mL、500 μg/mL、1000 μg/mL和2000 μg/mL的巴氏蘑菇多糖作用巨噬细胞RAW264.7 12 h、24 h和36 h,采用MTT法检测巴氏蘑菇多糖对巨噬细胞的增殖作用。(2)相同浓度巴氏蘑菇多糖及脂多糖(LPS,阳性对照)作用巨噬细胞RAW264.73h、6h、12 h、18 h和36h;不同浓度巴氏蘑菇多糖及LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h;TLR4抗体作用巨噬细胞1 h后,更换含有巴氏蘑菇多糖和LPS的细胞培养液作用24 h。然后分别收集细胞培养上清和细胞,检测细胞培养上清中巨噬细胞的NO生成量;提取巨噬细胞全细胞蛋白,检测巨噬细胞的iNOS含量;采用ELISA法检测细胞培养上清细胞因子IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量;提取细胞总RNA,采用荧光定量RT-PCR法测定巨噬细胞 TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88、TRAM、TRAF-6 mRNA 表达量。[结果](1)巴氏蘑菇多糖对巨噬细胞RAW264.7作用12 h、24 h和36h后,与空白对照相比,多糖有促进巨噬细胞RAW264.7增殖的作用,浓度为62.5 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL 和 1000 μg/mL 差异极显著(P<0.01),其中 1000 μg/mL 促进巨噬细胞RAW264.7增殖作用最大。(2)巴氏蘑菇多糖和LPS作用巨噬细胞不同时间的NO生成量随时间的增加而增多,NO的生成量高于阴性对照,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。在每个时间段内,LPS作用巨噬细胞的NO生成量都明显高于多糖,差异极显著(P<0.01)。(3)不同浓度巴氏蘑菇多糖和LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h,巨噬细胞NO生成量极显著高于阴性对照(P<0.01)。LPS作用巨噬细胞NO生成量高于多糖,多糖浓度为 250 μg/mL、500 μg/mL、2000 μg/mL 时,差异极显著(P<0.01);1000 μg/mL 时,差异显著(P<0.05)。在一定浓度范围内,多糖作用巨噬细胞NO生成量随浓度增加而增加,其中多糖浓度为1000 μg/mL时,NO生成量最大。多糖和LPS作用的TLR4抗体处理的巨噬细胞NO生成量分别低于未处理的,差异分别是显著(P<0.05)或极显著(P<0.01),但仍高于阴性对照,差异极显著(P<0.01)。(4)巴氏蘑菇多糖和LPS作用巨噬细胞RAW264.7 24 h,细胞iNOS含量明显高于阴性对照,差异极显著(P<0-0.01)。LPS作用巨噬细胞后的iNOS含量明显高于多糖,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。在一定浓度范围内,多糖作用巨噬细胞的iNOS含量随浓度增加而增加,其中多糖浓度为1000 μg/mL时,iNOS含量最大。(5)巴氏蘑菇多糖和LPS作用巨噬细胞RWA264.7 24h后,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β含量明显高于阴性对照,差异极显著(P<0.01);LPS作用的巨噬细胞IL-1 β、TNF-α、IFN-β含量明显高于巴氏蘑菇多糖。在一定浓度范围内,细胞培养上清中IL-1β、TNF-α、IFN-β的含量随巴氏蘑菇多糖浓度增大而增大,浓度为1000 μg/mL时IL-1β、TNF-α、IFN-β含量达到最大。经TLR4抗体处理的巨噬细胞经多糖和LPS作用,IL-1β、TNF-α、IFN-β含量低于未处理组,差异极显著(P<0.01)。(6)随着巴氏蘑菇多糖浓度的增大,巨噬细胞RAW264.7的TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88、TRAM、TRAF-6 mRNA表达量增大;经TLR4抗体处理,巴氏蘑菇多糖和 LPS 作用巨噬细胞后的 TNF-α、IL-1β、IL-6、TLR4、MyD88、TRAM、TRAF-6 mRNA表达量明显低于未处理组,差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。[结论]巴氏蘑菇多糖促进巨噬细胞RAW264.7细胞增殖,并通过TLR4受体信号转导通路调节巨噬细胞RAW264.7的免疫功能,TLR4是巴氏蘑菇多糖的受体之一。