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目的建立从慢性乙型肝炎患者(CHB)外周血分离培养树突状细胞(dendritic cellDC)及检测其表面分子与诱导淋巴细胞增殖能力的方法;研究慢性乙型肝炎患者DC的表面分子的表达及诱导淋巴细胞增殖能力,以及在患者接受了拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗后,DC功能改变情况。方法选取未接受抗病毒治疗的CHB患者,从外周血中分离单个核细胞,在含GM-CSF、IL-4、TNF-α的完全培养基中诱导培养为DC,倒置显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测其表面分子表达,混合淋巴细胞反应(MLR)检测其刺激淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)。然后抽取10例接受了拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗CHB患者于治疗前及治疗52周后,分别抽取外周血分离和培养DC,检测其表面分子及刺激淋巴细胞增殖的能力,并与正常健康人及拉米夫定耐药患者的DC功能进行比较。结果1、CHB患者的外周血单个核细胞,在联合应用GM-CSF 1000u/ml、IL-4 1000u/ml及TNF-α1000u/ml下,在体外可诱导出具有典型形态及生物学活性的DC。但与正常健康者相比,CHB患者DC突起较少,且具有突起的细胞较少。经过拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗52周后,患者DC形态有所改善,突起增多。2、正常健康者、CHB患者抗病毒治疗前及拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗后、拉米夫定耐药患者的DC存活率分别为(88.51±5.793)%、(82.84±7.588)%、(84.16±9.133)%,(83.68±6.752)%,方差分析得,四组无区别。3、CHB患者的DC表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR的表达分别为(32.16±6.340)%、(36.65±6.867)%、(44.77±8.127)%,与正常健康着相比,明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01)。经过拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗后患者DC的CD80、HLA-DR表达与治疗前相比有所升高,分别为(44.39±5.391)%、(65.02±8.801)%,差异有统计学意义(P＜0.05),但与正常健康者相比,仍有所降低(P＜0.05);CD86与患者治疗前相比有所升高,但无显著统计学差异(P＞0.05)。拉米夫定耐药的患者DC表面共刺激分子CD80、CD86、HLA-DR的表达分别为(32.85±8.068)%、(38.34±4.665)%、(45.41±6.752)%与核苷类抗病毒治疗前CHB患者相比无差别,与正常健康者相比,明显降低。4、CHB患者DC刺激淋巴细胞增殖的刺激指数(SI)为1.39±0.375,与正常健康者DC的SI相比,明显低下,有统计学意义(P＜0.01)。经过拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗后患者的DC的SI为1.65±0.590,与治疗前患者的DC相比,有所提高(P＜0.05)。拉米夫定耐药的患者为1.37±0.392,与CHB患者核苷类抗病毒治疗前相比无差别,与正常健康者相比,明显降低。结论慢性乙型肝炎患者的外周血单个核细胞在联合应用GM-CSF、IL-4及TNF-α时可以诱导出具有生物学活性的DC,但其表面的协同刺激分子明显减少,刺激淋巴细胞增殖的能力也明显低下。表明HBV可以使慢性乙型肝炎患者DC功能降低,这将导致患者的HBV特异Th细胞及CTL细胞不能被有效激活,从而使患者体内的HBV不能被有效清除。而得到拉米夫定与阿德福韦酯交替治疗52周的CHB患者的DC,其表面协同刺激分子及刺激淋巴细胞增殖的功能都得到了一定程度的恢复。说明核苷类抗病毒药不仅通过抑制逆转录酶减少病毒载量,而且在长期的抑制病毒复制后,患者的DC功能可以得到恢复,从而改善患者的免疫功能。