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目的:探讨PINK1与parkin,P62与LC3两对蛋白在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)模型大鼠肝细胞线粒体选择性自噬中的相关性以及“脂肝方”对于NASH的干预效应。方法:将90只SD大鼠适应性喂养1w,然后随机挑选出20只作为正常对照组,使用普通饲料喂养,分别在第8w末和第12w末处死10只。剩余的70只大鼠喂食高脂饲料8w以复制非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,10只随机分配到8w模型组(该组未接受任何药物,高脂喂养第8w后处死),10只分配到自愈组(该组不予任何药物,高脂喂养第8w为止,第9w至第12w予普通饲料喂养)。剩下50只大鼠继续进行高脂饲料喂养至12w,将其依次随机分成12w模型组(该组不予任何药物,高脂饲料喂养至第12w后处死);脂肝方高、中、低剂量组;西药组(立普妥灌胃),每组10只。此五组大鼠于第12w末处死并采集标本,使用全自动生化仪检测大鼠ALT、AST、TG、TC的水平;免疫共沉淀检测PINK1和parkin,P62和LC3两组蛋白相互作用;激光共聚焦显微镜观察PINK1、parkin、P62、LC3蛋白的定位。结果:1、与同期正常组相比,8w模型组和12w模型组血清内TC、TG、AST、ALT水平显著上升(P<0.01);随高脂饮食饲养时间增长,12w模型组血清内TC、TG指标的水平以及肝功能AST、ALT指标水平也随之增长(P<0.01),说明造模成功,第8w至第12w这段时间NAFLD在向NASH进展。即高脂饮食诱导了NAFLD大鼠肝细胞损害并且致使血脂升高,久而久之导致肝脏脂质沉积而诱发NSAH。与12w模型组比较,各治疗组大鼠体内TC、TG、AST、ALT水平显著降低(P<0.01);与8w模型组比较,除自愈组外(P>0.05),各治疗组大鼠体内TC、TG、AST、ALT水平显著降低(P<0.01)。与西药组比较,脂肝方高剂量组血清内TC、TG以及AST、ALT水平显著降低(P<0.05,P<0.01),在治疗组中疗效最优,脂肝方中剂量及脂肝方低剂量组则无统计学意义(P>0.05)。说明脂肝方能够改善肝脏血脂水平以及肝功能水平。2、经Western Blot检测,各组在免疫共沉淀实验之前均能够测到PINK1和parkin的表达。共沉淀结果表明使用PINK1抗体沉淀目的蛋白,parkin抗体检测目标沉淀物,发现各组样本中PINK1和parkin蛋白均能检测到;用parkin沉淀PINK1蛋白,发现不同处理组均能检测到不同程度的共沉淀现象。PINK1和parkin蛋白产生相互作用;其中正常组、模型组和自愈组之间的相互作用程度相对偏弱,而脂肝方组和西药组作用相对较强。共沉淀结果表明使用P62抗体沉淀目的蛋白,LC3抗体检测目标沉淀物,发现各组样本中P62和LC3蛋白均能检测到;用LC3沉淀P62蛋白,发现不同处理组均能检测到不同程度的共沉淀现象,P62和LC3蛋白产生相互作用;自愈组相互作用最弱,正常组和模型组相对也比较弱,而脂肝方组和西药组相互作用比较强。3、通过共聚焦显微镜观察发现,PINK1于肝脏的阳性表达位于细胞浆内,并且集中在中央静脉和汇管区附近。与同期正常组相比,模型组PINK1蛋白阳性率明显降低(P<0.05),与8w模型组对比,除自愈组、脂肝方低剂量外(P>0.05),各治疗组PINK1蛋白阳性率则明显升高(P<0.05)。与12w模型组相比,各组的PINK1蛋白阳性率均有显著升高(P<0.05);在治疗组中,与西药组比较,除脂肝方低剂量组外(P<0.05),各治疗组PINK1蛋白阳性率则明显升高(P<0.05)。parkin蛋白在肝脏中的阳性表达分别位于细胞浆、细胞核或细胞膜,主要集中在中央静脉和汇管区周围。与同期正常组相比,模型组parkin蛋白阳性率明显降低(P<0.05);与8w模型组对比,除自愈组外(P>0.05),各治疗组parkin蛋白阳性率则明显升高(P<0.05)。与12w模型组比较,各组parkin蛋白阳性率均显著升高(P<0.05),其中脂肝方高剂量组显著优于西药组(P<0.05),脂肝方低剂量组和西药组无明显差异(P>0.05)。P62蛋白在肝脏中的阳性表达分别位于细胞浆或细胞核,主要集中在中央静脉和汇管区周围。与同期正常组相比,模型组P62蛋白阳性率明显升高(P<0.05),与8w模型组对比,除自愈组外(P>0.05),各治疗组P62蛋白阳性率则明显降低(P<0.05)。与12w模型组相比,各组P62蛋白阳性率均显著降低(P<0.05);与西药组比较,除脂肝方低剂量组外(P<0.05),各治疗组P62蛋白阳性率则明显降低(P<0.05)。LC3蛋白在肝脏中的阳性表达分别位于细胞浆或胞膜,主要集中在中央静脉和汇管区周围。与同期正常组相比,模型组LC3蛋白阳性率明显降低(P<0.05),与8w模型组对比,除自愈组、脂肝方低剂量外(P>0.05)各治疗组LC3蛋白阳性率则明显升高(P<0.05)。与12w模型组相比,各组LC3蛋白阳性率均显著升高(P<0.05);在治疗组中,与西药组比较,除脂肝方低剂量组外(P<0.05),各治疗组LC3蛋白阳性率则明显升高(P<0.05)。结论:一、高脂喂养能够使大鼠罹患NAFLD,并会诱导NAFLD向NASH进展。二、脂肝方可以明显改善NASH大鼠的肝脏血脂水平以及肝功能水平,且对NASH有着改善作用。三、PINK1与parkin,P62与LC3之间存在着相互作用关系,并可能通过这种相互作用影响着NASH肝细胞线粒体的选择性自噬机制。