【摘 要】
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目的:验证中途进退式聚合酶链反应(drop in/out PCR)对于检测肿瘤样品中的人类巨细胞病毒(HCMV)的灵敏性和准确性,并通过对50例人颅内肿瘤标本中的HCMV检测,分析HCMV感染与肿
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目的:验证中途进退式聚合酶链反应(drop in/out PCR)对于检测肿瘤样品中的人类巨细胞病毒(HCMV)的灵敏性和准确性,并通过对50例人颅内肿瘤标本中的HCMV检测,分析HCMV感染与肿瘤分型,WHO分级,以及与细胞受体PDGFRα和EGFR的关系。方法:应用基因克隆技术,构建HCMV克隆质粒,并进行梯度稀释,用drop in/out PCR检测不同梯度的HCMV质粒,确定可检测到的最低质粒浓度,分析此方法对于检测该病毒核酸的灵敏性。然后,用drop in/out PCR检测50例颅内肿瘤样品中的HCMV,并用免疫组化技术对有效结果的样品检测HCMV IE抗原来验证drop in/out PCR的准确性。结合病理资料分析HCMV感染与肿瘤分型以及WHO分级的关系。最后,用免疫组化技术检测所有有效结果样品的PDGFRα和EGFR抗原,并结合之前HCMV IE和drop in/out PCR检测结果分析HCMV感染与细胞受体PDGFR和EGFR的关系。结果:我们发现,对不同梯度浓度的HCMV质粒进行drop in/out PCR检测后,可检测到的最低质粒浓度为5*10~4个质粒分子/ml,验证了此方法灵敏度较好。在对50样品的检测中,得到有效结果41例,其中HCMV阳性29例,统计分析证明其阳性率与41例样品的HCMV IE免疫组化结果无明显差别(p>0.05),并且两者结果一致性可(p<0.05),进一步证实drop in/out PCR对于检测肿瘤样品中的HCMV准确性尚可。我们还发现,HCMV感染与否和其感染强度与胶质瘤类型以及胶质瘤WHO分级无明显相关性(p>0.05),HCMV感染与否与两种细胞受体是否表达无明显相关性(p>0.05),HCMV感染强度与EGFR表达量之间存在正相关关系(p<0.05),而与PDGFRα无明显正相关关系(p>0.05)。结论:1.drop in\out PCR可以用于检测胶质瘤样品中的HCMV,并且其灵敏性与准确性均较好。2.HCMV是否感染、感染强度均与胶质瘤病理类型以及WHO分型无明显相关性。3.HCMV是否感染与PDGFRα和EGFR是否表达相关性不显著,HCMV感染强度与EGFR表达量显著正相关,而与PDGFRα表达量无明显正相关关系。
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