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本研究首先进行了原代小鼠乳腺上皮的体外培养与鉴定,并以原代小鼠乳腺上皮细胞为实验材料,利用LPS刺激乳腺上皮细胞,研究乳腺上皮细胞的主动防御功能及LPS对乳腺上皮细胞造成的影响,进一步揭示了牛磺酸抵抗LPS诱导的乳腺上皮细胞去功能的作用。1小鼠乳腺上皮细胞的原代培养与鉴定无菌采取健康妊娠小鼠的乳腺组织,采用胶原酶和透明质酸酶联合消化获得小鼠乳腺上皮细胞。生长培养液为DMEM/F12,含10%胎牛血清,添加胰岛素(5μg/m1)、 EGF(1Ong/mL)、氢化可的松(1μg/ml)、青霉素(100U/mL)和链霉素(100U/mL)。用倒置显微镜观察细胞形态,发现细胞在生长过程中呈典型的上皮样形态；角蛋白免疫荧光染色结果为阳性,说明该培养体系的细胞为上皮细胞；β-casein免疫印迹测定结果表明,该乳腺细胞具有分泌功能。提示成功的分离出了原代小鼠乳腺上皮细胞,且细胞的生物学活性和功能完备,可以作为实验材料。2LPS对原代小鼠乳腺上皮细胞的影响选用体外条件下培养的原代小鼠乳腺上皮细胞为实验对象,用含LPS终浓度为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的培养液处理24h后收集上清液和细胞。与对照组相比,5μg/mL、1Oμg/mL、20μg/mL LPS处理组N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)活性、NO含量和IL-1β, TNF-α, IL-6, LF mRNA表达水平均显著升高(P<0.01)；10μg/mL,20μg/mL LPS处理组IL-1β, TNF-a, IL-6的含量显著升高(p<0.05)；20μg/mLLPS显著降低了β-casein的分泌(P<0.05)。再者,细胞存活率实验表明,20μg/mL LPS显著降低细胞存活率,5μg/mL、10μg/mL LPS处理组与对照组相比无显著性差异。说明10μg/mL LPS对原代小鼠乳腺上皮细胞的功能造成了影响,但不影响细胞的存活率。3牛磺酸抵抗LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞去功能的作用原代小鼠乳腺上皮细胞,用含有0,5,15,45mmol/L牛磺酸的培养液处理细胞,3h后用10μg/mL(?)LPS刺激细胞24h,收集上清液和细胞。以不添加牛磺酸和LPS的培养液为正常对照；以不添加牛磺酸,只添加LPS的培养液为阳性对照。与阳性对照组相比,5mmol/L,15mmol/L,45mmol/L牛磺酸处理组N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAGase)的活性和NO的含量显著降低(P<0.01);15mmol/L,45mmo1/L牛磺酸处理组IL-1β,TNF-α,IL-6的含量及其mRNA表达水平显著降低(P<0.05)；LF的mRNA表达水平显著降低(p<0.05)。说明牛磺酸可以抑制炎性相关细胞因子和炎性相关酶的过度释放,对LPS诱导的小鼠乳腺上皮细胞的功能失常有抵抗作用。