【摘 要】
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为了探索FcRn在出生至断奶后仔猪胃肠道组织中的表达规律及其与仔猪肠道IgG转运的相关性,本文以长白杂交二元仔猪为研究对象,对猪FcRn基因进行克隆与序列分析,并采用RT-PCR法
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为了探索FcRn在出生至断奶后仔猪胃肠道组织中的表达规律及其与仔猪肠道IgG转运的相关性,本文以长白杂交二元仔猪为研究对象,对猪FcRn基因进行克隆与序列分析,并采用RT-PCR法对不同日龄二元仔猪胃肠道中FcRn水平进行了定量检测。主要结果如下:1.猪FcRn基因的克隆与序列分析:提取十二指肠组织总RNA,利用Primer 5.0引物设计软件设计一对PCR引物,然后利用设计的引物进行RT-PCR,PCR产物与pMD-19T载体连接后转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆并测序;FcRn阳性克隆两条序列在NCBI上比较,显示序列同猪FcRn(AY740682.1)同源性都为99 %。克隆了猪FcRn基因的序列和其剪接变体序列,其剪接变体序列已在GenBank上注册(Accession. EU852582)。2.仔猪胃肠道组织FcRn mRNA的定量检测:根据GenBank公布的猪FcRn重链mRNA基因保守序列自行设计PCR引物和荧光探针,并以β-actin为管家基因,对仔猪胃肠道组织中FcRn的表达进行了定量检测。结果表明,FcRn mRNA表达量随日龄的变化规律为:出生当天表达水平较低,未吃初乳(0 w)和已吃初乳(0 y)没有显著差异(P>0.05);1 d时表达水平显著升高(P<0.05),随后维持在较稳定的水平直至21 d时有所下降;28 d时FcRn在胃肠道各部位表达均有显著升高(P<0.05);35 d时则普遍回落到与前期相近的水平。FcRn在仔猪胃肠道组织中平均表达有显著差异。十二指肠远端表达水平最高;其次是空肠近端;十二指肠近端和空肠远端的表达量次之;在仔猪回肠和结肠部位均为低表达,且表达量极为接近;FcRn在仔猪胃内也有表达,但表达量最低(△Ct =6.91)。
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