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沙门氏菌病(salmonellosis)是各种动物由沙门氏菌属细菌引起的疾病的总称。临床表现为败血症和肠炎,可导致怀孕母畜流产,也可导致人食物中毒和急性胃肠炎。肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)是引起人类食源性疾病的主要革兰阴性菌之一,引起家禽发病死亡,造成严重的经济损失,并且被肠炎沙门氏菌污染的畜禽产品严重危害人类健康,已成为公共卫生的所关注的问题。因此研制一种有效的疫苗控制本病,是科研人员所面临的重要任务。本试验构建出基于焦亡相关蛋白基因介导的新型菌蜕的溶菌质粒,然后在大肠杆菌DH5α中测定溶解率,达到99.99%以上,可用于肠炎沙门氏菌菌蜕的制备。采用电击穿孔法将溶菌质粒转入肠炎沙门氏菌中,在阿拉伯糖诱导下使其裂解,制成沙门氏菌菌影疫苗。用制备的沙门氏菌菌蜕疫苗小鼠进行免疫。将100只6-8周龄的小鼠,随机分为5组,即为灭活苗组、灭活苗+佐剂组、菌蜕组、新型菌蜕组和对照组,共免疫3次。免疫后眼部采血分离血清,以沙门氏菌超声上清为包被抗原,用间接ELISA方法检测血清中IgG水平。刺激分离免疫小鼠脾细胞,刺激物为肠炎沙门氏菌脂多糖(LPS),试剂盒检测细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌情况,并用流式细胞仪检测CD4~+及CD8~+细胞亚群动态变化。三免后7天用SM6进行攻毒。攻毒1周后,观察临床症状、存活动物数及病理组织学研究,评价免疫保护效果。试验结果表明,随着免疫次数的增加,各试验组血清特异性抗体水平逐渐升高,对照组与实验组差异极显著(P<0.001),新型菌蜕组与灭活苗组差异极显著(P<0.001),与灭活苗+佐剂、菌蜕组差异不显著(P>0.05)。细胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的检测结果显示,与对照组相比,各实验组IL-2、IL-4和IFN-γ的细胞因子水平也呈上升趋势,能引起较强的细胞免疫。CD4~+及CD8~+亚群的动态变化表明疫苗组可诱导淋巴细胞的增殖,各实验组与对照组差异极显著(P<0.001),新型菌蜕组与灭活苗组差异极显著(P<0.001),与灭活苗+佐剂、菌蜕组差异不显著(P>0.05)。从攻毒后保护效果来看,各试验组高于对照组,新菌蜕组与菌蜕组保护率相同为100%,灭活苗组保护率为30%,灭活苗+佐剂保护率为70%,攻毒后无明显发病症状。结果表明新沙门氏菌菌蜕疫苗能够诱导较高的细胞免疫和体液免疫,对沙门氏菌的攻击起到了很好的保护作用,本研究结果为肠炎沙门氏菌新型疫苗的研制提供了基础。