【摘 要】
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CHAF1b是染色质组装因子1（CAF-1）复合物的p60亚基,在复制叉负责招募组蛋白H3/H4完成DNA复制耦联的核小体组装。前期研究表明CHAF1b参与多种生物学进程,包括DNA复制、核小体组装、DNA损伤修复、细胞周期、细胞增殖和细胞分化等。本试验通过RNAi技术研究CHAF1b基因在小鼠早期胚胎发育过程中的作用,研究结果如下:1)通过定量及免疫荧光染色试验,确定了CHAF1b在小鼠卵母细胞
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目 （编号:3187300）；
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CHAF1b是染色质组装因子1（CAF-1）复合物的p60亚基,在复制叉负责招募组蛋白H3/H4完成DNA复制耦联的核小体组装。前期研究表明CHAF1b参与多种生物学进程,包括DNA复制、核小体组装、DNA损伤修复、细胞周期、细胞增殖和细胞分化等。本试验通过RNAi技术研究CHAF1b基因在小鼠早期胚胎发育过程中的作用,研究结果如下:1)通过定量及免疫荧光染色试验,确定了CHAF1b在小鼠卵母细胞及着床前胚胎发育过程中的表达模式。结果显示:CHAF1b的m RNA表达从2-细胞阶段开始增加,在桑葚胚阶段达到最高,然后急剧下降;CHAF1b蛋白定位在细胞核,在生发泡（GV）、减数第二次分裂中期（MII）和合子期中不表达,从2-细胞期到囊胚表达量逐渐增加。表明CHAF1b是小鼠胚胎早期合子基因,主要在2-细胞至囊胚阶段的胚胎中表达。2)通过RNAi显微注射试验,研究敲降CHAF1b对小鼠植入前胚胎发育的影响,结果显示:敲低CHAF1b并不影响囊胚发育率,但导致孵出率下降（p<0.01）,体外附植生长失败（p<0.01）。同时发现敲降CHAF1b导致囊胚质量下降,包括囊胚细胞总数、内细胞团（ICM）和滋养外胚层（TE）细胞数目减少;囊胚细胞凋亡和DNA损伤增加。3)研究发现敲降CHAF1b引起胚胎第一次谱系分化的关键调控因子（包括Oct4,Cdx2,Sox2和Nanog）的表达下调。进一步的分析表明,敲降CHAF1b导致组蛋白H3.1/3.2丰度增加和组蛋白H3.3丰度减少,同时发现抑制性组蛋白标记（H3K9me2/3和H3K27me2/3）丰度减少和激活性组蛋白标记（H3K4me2/3）丰度增加。4)RNA-seq分析显示敲降CHAF1b导致1508个基因的差异表达,包括表观遗传修饰,谱系分化和凋亡相关的基因。ATAC-seq测序分析的结果表明,沉默CHAF1b会导致谱系分化基因和凋亡相关基因的染色质可及性改变。综上所述,本论文研究了CHAF1b在早期胚胎发育中的功能。证明CHAF1b在小鼠植入前的胚胎中发挥着重要作用。
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