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目的Survivin是凋亡抑制蛋白（the inhibitor of apoptosis,IAPs）家族中的最小的成员,同时也是染色体乘客复合物（Chromosomal Passenger Complex,CPC）的组成成分之一,在细胞存活和有丝分裂的调控中起着重要的作用。大量的研究发现Survivin和肿瘤的发生发展密切相关。目前的研究已经发现了几种E3泛素连接酶能泛素化Survivin,使其通过泛素-蛋白酶体依赖性的途径降解,从而影响Survivin蛋白介导的下游生物学功能,是否存在与泛素连接酶相对的去泛素化酶（Deubiquitinating enzyme,DUB）能够稳定Survivin并且调控其生物学功能还需要进一步的研究。为了回答这个问题,本研究利用实验室构建的包含96个去泛素化酶的基因表达文库,旨在筛选出能够稳定Survivin蛋白水平的去泛素化酶,进而探讨去泛素化酶调控Survivin蛋白稳定性的分子机制及其在肿瘤发生发展中的生物学功能。方法1.将Survivin表达质粒转染进MCF7细胞中,收样前6h加入蛋白酶体抑制剂MG132,之后收集细胞样品,提取蛋白,通过Western Blot检测Survivin的蛋白水平。2.将去泛素化酶表达文库的96个质粒分别与Survivin质粒共转进MCF7细胞中,36h后收集细胞样品,提取蛋白,Western Blot检测Survivin的蛋白水平。3.利用实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR,q PCR）检测USP38（Ubiquitination-Specific Protease 38）对Survivin的m RNA表达水平的影响。4.通过加入蛋白合成抑制剂放线菌酮CHX（Cycloheximide）,确定USP38对Survivin半衰期的影响。5.利用免疫共沉淀技术确定USP38与Survivin之间的相互作用。6.通过去泛素化实验确定USP38能否去泛素化Survivin。7.在USP38果蝇同源基因DUBAI与Survivin果蝇同源基因Deterin中,通过半衰期实验,免疫共沉淀技术,去泛素化实验等确定DUBAI与Deterin二者之间的关系。8.通过免疫共沉淀,半衰期实验确定USP38与CPC中其他成分的相互作用及调控作用。9.利用CCK-8（Cell Counting Kit-8）测定细胞活力进而确定USP38对MCF7细胞增殖的影响。结果1.与对照组相比,加入MG132的实验组稳定了Survivin的蛋白水平。2.在利用去泛素化酶库表达文库进行筛选时发现USP38能够明显地稳定Survivin的内外源蛋白水平但不影响其m RNA表达水平,并且能够显著延长Survivin的半衰期。3.免疫共沉淀实验确定了USP38与Survivin之间的相互作用。4.去泛素化实验证实了USP38去泛素化Survivin并且依赖于它的去泛素化酶活性。5.免疫共沉淀,去泛素化实验确定了果蝇同源物基因DUBAI通过去泛素化Deterin来稳定Deterin的蛋白表达水平,并且二者也存在相互作用。6.USP38与CPC中其他组份Aurora B,CDCA8之间存在相互作用,并且USP38能够延长二者的半衰期。7.细胞活力测定实验证实了USP38能够促进MCF7细胞增殖,并且敲低Survivin能够抵消这种促增殖现象。结论通过筛选发现去泛素化酶USP38能够稳定Survivin的蛋白水平;USP38与Survivin存在相互作用并且USP38通过依赖其去泛素化酶活性去泛素化Survivin。在果蝇基因组中,DUBAI和Deterin存在相互作用并去泛素化Deterin从而稳定Deterin蛋白水平,说明USP38调控Survivin在进化上高度保守。USP38也能和CPC其他组成蛋白Aurora B,CDCA8相互作用,并稳定二者的蛋白水平。USP38还可以通过调节Survivin蛋白稳定性促进细胞增殖。