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目的观察理筋手法对兔颈后肌慢性静力性损伤的影响,从组织形态学、细胞骨架结构、中枢和外周疼痛递质探讨理筋手法对损伤模型的修复作用及镇痛效应。方法将日本大耳兔68只随机分为三组:空白组、模型组(10d、20d、30d)、治疗组(10d、20d、30d)。模型组和治疗组采用颈椎前屈45°进行造模,建立骨骼肌慢性静力性损伤模型。造模60天后,治疗组给予理筋手法,模型组造模后在笼中自然恢复。分别在造模后10d,20d,30d取材。采用HE染色观察组织病理变化,透射电镜观察组织的超微结构,免疫组织化学法检测α-actin、desmin的表达,用酶联免疫吸附法(ELIZA)检测兔脊髓和下丘脑中SP(Substance P,SP)和ENK(Enkephalin,ENK)的含量,及外周血清和软组织中NOS(Nitric Oxide Synthase,NOS)、5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)的含量。所有数据用SPSS 22.0统计软件进行分析。结果1.模型评估:肌组织形态学切片可见:纵切面观察,大部分肌纤维排列紊乱,扭曲变形,大量炎性细胞浸润,横切面肌细胞萎缩,说明本次实验兔颈后肌静力性损伤造模成功。2.HE染色观察结果:空白组肌纤维排列整齐,细胞核结构完整。模型组10d肌纤维水肿、扭曲断裂,可见红细胞及炎性细胞浸润。模型组20d肌纤维扭曲,有空泡组织出现,梭形的成纤维细胞数量增多,炎性细胞减少。模型组30d肌纤维排列扭曲并有瘢痕组织。治疗10d时可见部分肌纤维水肿、扭曲,出血较少,大量炎性细胞浸润。治疗组20d成纤维细胞增多,肌纤维大部分排列整齐。治疗组30d,肌纤维整体排列致密整齐。3.透射电镜下观察:空白组肌丝整齐,肌节完整,线粒体嵴完整。模型组10d,可见肌丝紊乱,肌纤维溶解,肌节模糊紊乱,有明确的线粒体空泡,Z线消失。模型组20d,肌纤维明显疏松,部分紊乱,局灶性线粒体质变。模型组30d,肌纤维扭曲,线粒体多但是完整,肌丝排列较整齐。治疗组10d,肌纤维扭曲,肌丝紊乱,大部分线粒体空泡,核染色质聚集。治疗组20d,线粒体完好,细胞核染色质均匀无聚集现象,线粒体嵴溶解断裂但无空泡。治疗组30d,肌丝排列整齐,线粒体完整,肌节完整,出现自噬溶酶体。4.免疫组织化学法检测结果:各组实验兔颈后肌α-actin、desmin平均光密度值(AOD)组间比较,模型组(10d,20d,30d)AOD值均显著低于空白组(p<0.05),治疗组(10d,20d,30d)AOD值均高于模型组各组(p<0.05),与空白组无显著性差异(p>0.05)。组内比较:模型组(10d,20d,30d)三组无显著性差异(p>0.05);治疗组(10d、20d、30d)三组无显著性差异(p>0.05)。5.酶联免疫吸附法检测结果各组实验颈段脊髓SP检测结果:组间比较:与空白组相比,模型组三组脊髓和下丘脑SP的含量高于空白组(p<0.05),治疗组(10d,20d)脊髓中SP和治疗组10d下丘脑SP的含量高于空白组(p<0.05);三个观察点治疗组脊髓中SP含量均显著低于模型组(p<0.05),20天和30天时,治疗组下丘脑中SP含量低于模型组(p<0.05)。组内比较:模型组三组脊髓和下丘脑中SP含量无显著性差异(p>0.05);治疗组(10d,20d)脊髓SP含量高于治疗组30d(p<0.05),治疗组10d下丘脑SP含量高于治疗组(20d,30d)(p<0.05)。各组实验兔颈段脊髓和下丘脑中ENK检测结果:组间比较:与空白组相比,三个观察点的治疗组和模型组脊髓及下丘脑中ENK的含量低于空白组(p<0.05);治疗组30d脊髓ENK含量高于模型组30d(p<0.05);治疗组(10d,20d)下丘脑ENK含量高于模型组(p<0.05)。组内比较:模型组(10d,20d,30d)三组无显著性差异(p>0.05);治疗组30d脊髓ENK含量高于治疗10d、20d组(p<0.05);治疗组10d ENK含量低于治疗组(20d,30d)(p<0.05)。各组实验兔血清和软组织中NOS检测结果:组间比较:与空白组相比,模型组三组血清和软组织中NOS含量均和治疗组三组血清中NOS的含量均高于空白组(p<0.05);治疗组(10d,20d)血清中NOS含量低于模型组(p<0.05);治疗组三组软组织NOS含量均低于模型组(p<0.05)。组内比较:血清中,模型组三组NOS无显著性差异(p>0.05),治疗10d组NOS含量高于治疗组(20d,30d)(p<0.05);软组织中,模型组30d NOS含量低于模型组(10d、20d)(p<0.05),治疗组三组软组织NOS无显著性差异(p>0.05)。各组实验兔血清和软组织中5-HT检测结果:组间比较:与空白组相比,模型组三组血清和软组织中5-HT含量高于空白组(p<0.05),治疗组10d血清中5-HT含量和治疗组(10d,20d)软组织中5-HT含量高于空白组(p<0.05);20天和30天时,治疗组血清和软组织5-HT含量5-HT低于模型组(p<0.05)。组内比较:血清和软组织中,模型组三组无显著性差异(p>0.05);治疗组10d5-HT含量高于治疗组(20d,30d)(p<0.05)。结论1.理筋手法对静力性损伤颈后肌组织形态有明显的改善作用,并有效促进颈后肌细胞骨架中α-actin、desmin的表达,促进损伤后颈后肌修复进程。2.理筋手法通过调节中枢脊髓和下丘脑中SP、ENK及外周血清及软组织中NOS、5-HT的含量,发挥镇痛作用。