【摘 要】
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目的探究抑制TRPM2通道后对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法选取8周左右的C57BL/6雄性小鼠80只随机分为假手术组（Sham）、大脑中动脉栓塞再灌注组（MCAO/R）和TRPM2通道抑制组（TRPM2通道抑制剂:N-（对戊基肉桂酰基）邻氨基苯甲酸,ACA）。采用线栓法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用Bederson评分法筛选损伤程度一致的模型进行后续实验。在小鼠缺血2h后腹腔注射25mg/
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目的探究抑制TRPM2通道后对小鼠脑缺血再灌注损伤的影响。方法选取8周左右的C57BL/6雄性小鼠80只随机分为假手术组（Sham）、大脑中动脉栓塞再灌注组（MCAO/R）和TRPM2通道抑制组（TRPM2通道抑制剂:N-（对戊基肉桂酰基）邻氨基苯甲酸,ACA）。采用线栓法建立小鼠脑缺血再灌注损伤模型,采用Bederson评分法筛选损伤程度一致的模型进行后续实验。在小鼠缺血2h后腹腔注射25mg/kg ACA（ACA组）。再灌注24h后,Bederson评分评价各组小鼠神经功能;激光散斑血流成像仪监测各组小鼠缺血侧皮质脑血流量变化;TTC染色评价各组小鼠缺血侧脑梗死体积;HE染色观察各组小鼠缺血侧颞侧皮质区、海马CA1、CA3及缺血半暗带区形态学变化;Nissl染色观察各组小鼠缺血侧颞侧皮质区、海马CA1、CA3及缺血半暗带区神经元数量的变化;TUNEL染色评价各组小鼠缺血侧脑组织细胞凋亡的变化;免疫荧光染色观察各组小鼠缺血半暗带区Iba-1、iNOS及LC3的表达;采用荧光定量PCR（qPCR）法检测各组小鼠大脑缺血侧TRPM2的mRNA表达水平;ELISA法检测各组小鼠血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达;Western Blot评价各组小鼠缺血侧脑组织自噬底物P62的蛋白表达变化。结果与Sham组相比,MCAO/R组Bederson评分上升（P<0.05）,与MCAO/R组相比,ACA组小鼠Bederson评分降低（P<0.05）。与Sham组相比,MCAO/R组小鼠的缺血侧脑皮质血流相对减少量较Sham组显著增加（P<0.05）,与MCAO/R组相比,ACA组小鼠缺血侧大脑皮质血流相对减少量明显降低（P<0.05）。TTC结果显示,与Sham组相比,MCAO/R组脑梗死体积显著上升（P<0.05）,与MCAO/R组相比,ACA组脑梗死体积显著减小（P<0.05）。HE及Nissl染色结果发现:与Sham组相比,MCAO/R组在缺血侧颞侧皮质区、海马CA1、CA3及缺血半暗带区均可见组织结构紊乱,细胞核固缩,嗜酸性细胞及淋巴细胞多见,神经细胞数量明显减少;与MCAO/R组相比,ACA组缺血侧颞侧皮质区、海马CA1、CA3及缺血半暗带区组织结构明显改善,炎症细胞明显减少,神经元数目明显增加。与Sham组相比,MCAO/R组小鼠缺血侧大脑皮质缺血半暗带区TUNEL阳性细胞数显著增加（P<0.05）;与MCAO/R组相比,ACA组小鼠缺血侧缺血半暗带区TUNEL阳性细胞数显著降低（P<0.05）。免疫荧光染色方法结果显示:与Sham组相比,MCAO/R组小鼠缺血半暗带区出现了大量的Iba-1阳性细胞（P<0.05）,胞体明显变大,突起变粗;可见大量的iNOS、LC3的阳性细胞表达（P<0.05）;与MCAO/R组相比,ACA组Iba-1、iNOS、LC3阳性细胞减少（P<0.05）。qPCR结果显示,与Sham组相比,MCAO/R组小鼠大脑缺血侧TRPM2 mRNA表达水平显著上调（P<0.05）;与MCAO/R组相比,ACA组小鼠缺血侧脑组织中TRPM2 mRNA表达水平显著下调（P<0.05）。ELISA结果显示,MCAO/R组小鼠TNF-α血清含量较Sham组显著升高（P<0.05）;与MCAO/R组相比,ACA组TNF-α表达水平显著减少（P<0.05）。Western Blot结果显示,与Sham组相比,MCAO/R组小鼠缺血侧脑组织中P62蛋白显著下调（P<0.05）;与MCAO/R组相比,ACA组小鼠缺血侧脑组织中P62蛋白显著上调（P<0.05）。结论抑制TRPM2通道对小鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其保护作用可能与抑制小胶质细胞活化和细胞自噬,从而减少炎性因子的分泌有关。
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