【摘 要】
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目的：克隆桂北五步蛇金属蛋白酶及酶原基因，并对其进行序列分析。 方法：从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA，利用不同的引物，采用一步法（RT-PCR和PCR在同一管内进行）扩增出不同的DNA条带，利
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目的：克隆桂北五步蛇金属蛋白酶及酶原基因，并对其进行序列分析。 方法：从桂北五步蛇毒腺中抽提总RNA，利用不同的引物，采用一步法（RT-PCR和PCR在同一管内进行）扩增出不同的DNA条带，利用平端连接的方法将PCR扩增产物克隆至pGEM-T Easy 载体，转化大肠杆菌JM109，挑选白色菌落提取质粒，用PCR对其进行鉴定，直接利用纯化PCR产物或提取阳性菌落质粒进行测序。 结果：其中一对引物扩增得到一600 bp产物；另一对引物扩增得到三条特异性的DNA条带，大小分别为1.5 Kb、1.3 Kb和800 bp，将600 bp 和800 bp DNA进行克隆及测序，并推导编码的氨基酸序列。 结论：600 bp产物和已报道的皖南五步蛇纤溶酶金属蛋白酶氨基酸序列相比较，有90.6%的同源性；800 bp产物中信号肽及前肽和已报道的皖南五步蛇金属蛋白酶很相似，同源性为97.9%，但仅含有部分金属蛋白酶成熟肽的氨基酸序列，推测此片段为广<WP=6>西五步蛇金属蛋白酶原基因的一部分。
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