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共振散射技术作为一种新的分析技术,因其高灵敏度和简便性引起了人们的关注,并在蛋白质、核酸、药物以及痕量金属离子、无机离子的分析中得到越来越多的应用。本文在前人研究的基础上,继续开拓共振散射技术在生化分析和痕量金属离子中的应用。本论文共分五章。
第一章为引言,介绍了共振散射光谱技术的原理及在生化分析中的应用;综述了金纳米微粒及其在分析化学中的应用;介绍了辣根过氧化酶(HRP)、癌胚抗原(CEA)和汞离子(Hg2+)的分析进展。
第二章在pH4.8的乙酸盐缓冲溶液中,邻苯二胺(OPD)形成粒径约380nm的微粒,在392nm、420nm、445nm、484nm、507nm有5个较强的Rayleigh散射峰。辣根过氧化酶(HRP)催化H2O2氧化邻苯二胺生成黄色的2,3-二氨基吩嗪产物,反应体系在420nm、445nm和484nm处的Rayleigh散射光信号显著减弱。在最佳实验条件下,HRP浓度在8.3×10-12~4.17×10-10g/mL范围内均与445nm和484nm处的Rayleigh散射强度的降低值成线性关系,检出限(3s)3.57×10-12g/mLHRP、5.40×10-12g/mLHRP。该法简便、快速、灵敏且选择性好。
第三章用粒径为10nm的金纳米粒子标记单克隆癌胚抗原抗体,制备了检测癌胚抗原(CEA)的共振散射光谱探针(Au—CEAAb)。CEA可与Au—CEAAb发生免疫反应聚集形成疏水性的、平均粒径为227.0nm的免疫复合物微粒,并在321nm、581nm产生2个共振散射峰。随着癌胚抗原(CEA)浓度的增大,581nm处的共振散射强度I581nm线性增加,其增加值△I581nm与CEA浓度在1.0~50.0ng/mL范围内呈良好的线性关系,检出限(30)分别为0.52ng/mL。该法简便、快速、灵敏且选择性好。
第四章用鲱鱼精DNA(hsDNA)修饰纳米金获得了Hg2+的DNA修饰纳米金探针(AuhsNDA)。AuhsNDA对葡萄糖还原Fehling试剂生成氧化亚铜微粒这一慢反应具有较强的催化作用,而氧化亚铜微粒在580nm处有一个最强的共振散射峰。Hg2+与AuhsNDA形成稳定的Hg2+—NDA结合物,导致纳米金析出并聚集形成纳米金簇。该溶液经过滤,滤液中过量的AuhsNDA可催化Fehling试剂—葡萄糖反应生成氧化亚铜微粒。580nm处氧化亚铜微粒的共振散射光强度线性降低值△I580nm与汞离子浓度在3~833nM范围内成线性,检出限分别为1nMHg2+。该法用于废水中Hg2+的检测,结果满意。
第五章对本研究课题进行了总结。