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虽然许多地区种植的棉花为抗枯萎病品种,但病害仍较为严重。本论文从生物防治原理出发,研究对棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f. sp.vasinfectum)具有拮抗作用的链霉菌,期望为棉花枯萎病的综合治理提供有效途径。
取不同生态条件下的土样若干,用稀释分离法获得放线菌207株。以棉花枯萎病菌等多种病原菌为目标菌,抑菌带法测定,共筛选到32株具有拮抗活性的放线菌菌株,占所分离总数的15.46%。其中K5对棉花枯萎病菌的拮抗作用最强,抑菌带宽为8mm,同时对其他病菌也有一定的拮抗作用,如水稻稻瘟病菌(Pyricularia grisea)等。
最有利于K5菌株拮抗作用发挥的培养条件是:利用大豆粉葡萄糖培养基,培养基pH为6.5-7.0,10%接种量,温度为28-31℃,120r/min振荡培养,时间为7d。
K5培养滤液可以破坏枯萎病菌菌丝形态,使菌丝畸形、细胞壁破损、甚至细胞崩解。培养滤液处理9h即可见病菌菌丝细胞异常,17h出现细胞崩解。不同浓度培养滤液对病菌作用的差异表现在,高浓度可以缩短严重症状出现的时间。当培养滤液稀释100倍时,对菌丝形态仍具有破坏作用。培养滤液可抑制病菌菌丝生长、分生孢子的产生,最高抑制率分别达88.41%和77.45%;对分生孢子萌发和芽管生长的抑制率分别是98.62%和49.72%。随浓度下降,滤液的抑制作用减弱,但100倍稀释液对菌丝生长、产孢和分生孢子萌发仍具有一定的抑制作用。
盆栽条件下,K5菌株的发酵滤液对棉花苗期枯萎病的防治效果达46.50%,与多菌灵浸种处理的防病效果相似。放线菌K5对棉苗不仅没有不良影响,反而有一定的促生作用,幼苗株高和鲜重均高于其他各处理。
K5菌株可以产生基质内菌丝和气生菌丝,气生菌丝形成孢子长链,孢子椭圆形至球形,表面光滑。K5在高氏一号培养基上生长旺盛,气生菌丝灰红色,基质菌丝黄褐色,不产生可溶性色素;能较好利用麦芽糖、半乳糖,一般利用葡萄糖和鼠李糖,不能利用蔗糖、阿拉伯糖、果糖等:可以使明胶液化,牛奶胨化,淀粉水解;可以产生硫化氢和黑色素。以上培养性状、生理生化特征都与玫瑰产色链霉菌(Streptomyces roseochromogenus)相近。K5菌株16S rDNA序列测定,与玫瑰产色链霉菌的同源性高达99.63%,遗传距离为12.4。因此,认为K5菌株应该是玫瑰产色链霉菌(S,roseochromogenus)。