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目的:人呼吸道合胞病毒(Human respiratory syncytial virus,RSV)广泛分布于世界各地,是导致婴幼儿严重下呼吸道感染的最重要的病毒病原。目前尚无特异性防治方法,世界卫生组织将发展RSV疫苗列为最优先发展的疫苗项目之一。RSV的11种蛋白中,融合蛋白(Fusion glycoprotein,F)是中和抗原,免疫动物后,可以产生具有免疫保护作用的中和抗体。本研究以减毒鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium aroA strain SL7207,SL7207)为载体携带可表达RSV密码子优化的F蛋白的真核表达质粒,探讨不同黏膜免疫途径及密码子优化对免疫效果的影响。 方法:通过对RSV野生型F基因(Fwt)进行密码子优化,获得密码子优化的F基因(Fsyn),并构建可表达Fsyn的真核表达质粒pcDNA3.1/Fsyn,通过Western blot分析来检测真核表达质粒pcDNA3.1/Fsyn的体外表达水平。转化SL7207得到SL7207/pcDNA3.1/Fsyn,构建重组的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/Fsyn。经重组菌体外稳定性试验后,分别经单次滴鼻和灌胃免疫途径,免疫BALB/c小鼠,通过体液免疫、黏膜免疫和细胞免疫等指标分析免疫后小鼠RSV特异性免疫应答产生情况,以及免疫效果的持续时间。 结果:取已转化pcDNA3.1/Fsyn的SL7207提取质粒,经限制性内切酶分析、测序与预期一致。与野生型相比较,可表达密码子优化型 F蛋白的真核表达质粒pcDNA3.1/Fsyn体外表达水平高;重组的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/Fsyn具有较好的体外传代稳定性(保持在89％以上)。与灌胃组相比,滴鼻组诱导小鼠产生了更高水平的血清IgG和呼吸道黏膜分泌型IgA(Secretary IgA,SIgA),获得了更好的免疫效果(P＜0.05)。与野生型相比,密码子优化的F蛋白具有更好的免疫原性(P＜0.05)。 结论:获得的重组减毒鼠伤寒沙门菌疫苗SL7207/pcDNA3.1/Fsyn,能够诱导机体产生有效的体液免疫和局部免疫。经滴鼻途径免疫和密码子优化能够提高以SL7207为载体的RSV DNA疫苗免疫效果。因此我们认为以减毒伤寒沙门菌为载体的滴鼻DNA疫苗兼具黏膜免疫及DNA疫苗的双重优点,是RSV等通过黏膜途径感染的病毒疫苗研究的重要方向,为今后RSV疫苗免疫策略等研究奠定了坚实基础。