甘草废弃物中黄酮的提取分离及其抗氧化作用研究

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甘草是豆科多年生草本植物,以根及根茎入药,是最常用且重要的中药之一,被称为“国老”,在中医里常有“十方九草”之说。甘草废弃物是甘草提取甘草酸后的废弃物,其中含有甘草黄酮,药理作用的深入研究表明这一类化合物具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、解毒等功效,具有广阔的开发及应用前景。因此,本课题对甘草废弃物中总黄酮的提取分离纯化和初步药效学进行研究,为综合开发利用工业上提取甘草酸后的废弃物提供依据。1.本论文建立了测定甘草总黄酮的紫外分光光度法和测定甘草苷含量的HPLC法,分别测定了12批不同产地甘草原药材及甘草酸提取过程中各工序产生的废弃物中总黄酮和甘草苷含量。2.以甘草总黄酮得率为检测指标,采用了回流提取法进行提取。通过单因素实验和正交试验方法确定了废弃物总黄酮的最佳提取工艺条件,即:提取时间2.5h,乙醇浓度70%,液料比为35:1,温度70℃。在此条件下提取,能得到总黄酮11.19mg/g,即甘草废弃物总黄酮含量为1.12%。3.比较了四种不同规格聚酰胺树脂的吸附、解吸性能,选择30-60目的聚酰胺树脂纯化甘草废弃物中总黄酮,采用pH为3浓度为1.44mg/mL黄酮提取液以1.0mL/min流速上样,用3倍柱体积水洗柱,再分别用3倍柱体积的20%、50%乙醇以1.0mL/min的速率洗脱,精制所得总黄酮粗品纯度达到53.36%。4.研究了甘草废弃物中总黄酮的体外抗氧化性实验及清除自由基的能力,采用Fenton类似反应和DPPH法测定和评价纯化后甘草黄酮的抗氧化效果,用分光光度法测定纯化的甘草黄酮对羟自由基(OH)和DPPH自由基的清除能力。测定了不同浓度甘草黄酮乙醇溶液对它们的清除能力,结果证明高浓度黄酮醇溶液对自由基具有较大的清除能力,降低了自由基的生成量,具有抗氧化、抗衰老的作用。5.对黄酮提取液在美白方面的功效研究:运用多巴酪氨酸酶速率氧化法体外测定黄酮提取液反应前后的酪氨酸酶活性,得出对酪氨酸酶活性的抑制率。结果表明,甘草黄酮提取液中具有抑制酪氨酸酶活性的物质,浓度越高抑制酪氨酸酶的效果越好。综上所述,本论文对甘草废弃物中黄酮提取纯化工艺所作的研究提供了对废弃物充分利用的依据,纯化后的黄酮液中具有清除自由基及抑制酪氨酸酶活性的有效成分,有望用于抗衰老和具有美白作用的产品中。
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