大肠杆菌半乳糖/葡萄糖结合蛋白(galactose/glucose-binding protein，GBP)是一种专一性的半乳糖/葡萄糖结合蛋白，由mglB基因编码，成熟蛋白位于细胞的周质空间，与化学趋化作用和半乳糖/葡萄糖的主动运输有关。GBP与半乳糖/葡萄糖结合的同时伴随着酶分子的构象变化，这种构象变化可以直接或间接转化为物理信号，并被相应仪器所检测。基于GBP的这一特点所开发的葡萄糖生物传感器，具有快速、灵敏、实时和微量的特点，是临床检测糖尿病人血糖浓度的理想仪器。天然的GBP与葡萄糖的反应过于灵敏，氨基酸序列中缺乏带有巯基的半胱氨酸，缺乏与载体连接的合适极性侧链氨基酸残基，限制了其在生物传感系统中的应用。 为了降低天然GBP与葡萄糖反应的灵敏度，提高与载体的结合能力，本文通过扩增大肠杆菌的mglB基因，在三个位点上对mglB基因进行了定点突变，分别得到了E149C，A213S，L238S单点、两点和三点突变的mglB基因，并利用大肠杆菌表达系统BL21(DE3)/pET28c，构建了过量表达天然和三种突变型mglB基因的重组质粒pLTMT系列和重组菌株BL21(DE3)/pLTMT系列。重组菌经摇瓶培养和IPTG诱导得到菌体，用渗透休克法提取周质空间蛋白。蛋白粗提液经Ni-NTA纯化后，得到了聚丙烯酰胺凝胶电泳纯的GBP。从500ml发酵液所获得的茵体中，可分离得到约1.68mg的GBP纯品。 为了简化GBP的分离提取工艺，本文用具有蛋白分泌系统的枯草芽孢杆菌做为表达GBP的受体菌，以实现GBP分泌型表达。利用枯草芽孢杆菌veg基因的启动子、lipA基因的信号肽序列、来自pLTMT3的的成熟GBP编码序列和His-6标签部分，构建了GBP表达质粒pHPVSG，并转化枯草芽孢杆菌DB104，得到了带有重组质粒的转化子。