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背景：过氧化物酶体增殖物激活受体Y (PPAR Y)属于核受体超家族中PPARs家族成员,为配体依赖性转录因子。PPARγ配体包括天然型配体和合成型配体,其中合成型配体噻唑烷二酮(thiazolidinediones,TZD)类药物可选择性的与PPARγ结合,TZD类药物能够增加骨骼肌中葡萄糖的利用,并降低体内肝脏的葡萄糖合成。有研究表明,PPARγ功能受损会导致严重的胰岛素抵抗。胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是胰岛α细胞和肠黏膜L细胞分泌的一种激素,含有30个氨基酸,经胰高糖素原加工,其N端形成胰高糖素,C端形成GLP-1和GLP-2。GLP-1的活性形式是GLP-1(7-36),可以促进葡萄糖依赖性的胰岛素分泌、减少食物的摄取、减慢胃的排空、以及抑制胰高血糖素的分泌、刺激胰岛β细胞增殖,促进胰岛再生,又能抑制胰岛β细胞的凋亡。目前已有研究证明PPARγ和GLP-1在糖尿病治疗中的作用,然而有无既可恢复胰岛素敏感性又能促进胰岛β细胞增殖药物的研究,尚未见有关报道。目的：本实验构建含人过氧化物酶体增殖物激活受体Y-胰高血糖素样肽-1的原核表达载体(pET32a-PPARγ-GLP-1),通过原核表达系统,获得大量融合蛋白,为进一步检测其生物活性提供研究基础。方法：从人脂肪中提取总RNA通过RT-PCR方法扩增出人PPARγ基因序列,从人外周血有核细胞中提取人类基因组DNA,PCR扩增获得GLP-1基因序列,通过基因重组技术构建pET32a-PPARγ-GLP-1,经双酶切及测序鉴定阳性克隆；转化入Rosseta(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,表达产物经10%SDS-PAGE凝胶电泳,并做Western boltting鉴定。融合蛋白经镍离子层析纯化。结果：1.成功构建pET32a-PPARγ-GLP-1表达载体,经双酶切及测序鉴定。2.10%SDS-PAGE结果表明,目的基因在大肠杆菌Rosseta(DE3)中以包涵体形式表达,相对分子量(Mr)73kDa。3.经诱导表达条件优化,在37℃,诱导剂IPTG浓度为1mmol/L,诱导10h,可获得大量PPARγ-GLP-1融合蛋白。4.经Ni-NTA纯化获得较高浓度融合蛋白。5.Western blotting显示目的蛋白能被anti-his标签抗体识别,再次证实目的蛋白成功表达。结论：本研究证实可以成功构建pET32a-PPARγ-GLP-1重组质粒,且目的基因可在大肠杆菌Rosseta(DE3)原核表达系统中以包涵体形式高效表达。本研究初步建立了获得PPARγ-GLP-1融合蛋白的方法,为药物研发提供了良好的研究基础。