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目的:
非编码RNA(non-codingRNA，ncRNA)已经成为核酸和蛋白质之外参与基因表达调控的另一类重要因子。本课题组通过对伤寒沙门菌（SalmonellaentericaserovarTyphi，S.Typhi）RNA序列分析和生物信息学预测，发现了包括AsrC在内的一些ncRNAs。本研究旨在对S.TyphincRNAAsrC进一步鉴定，并研究其特性，以便对AsrC参与的基因表达调控进行深入研究。
方法:
1.AsrC的鉴定:利用NorthernBlot和qRT-PCR对AsrC进行存在性、完整性验证，并观察其生长时相表达特性。
2.AsrC的分子全长鉴定:分别利用5′和3′RACE实验寻找AsrC的转录起始点和转录终止点，以确定AsrC的分子全长。
3.AsrC在应激条件下的表达量分析:利用NorthernBlot和qRT-PCR对伤寒沙门菌在不同生长时期，酸、氧及高渗环境应激后AsrC的水平进行分析。
4.基因缺陷变异株的制备:利用λ-Red系统制备伤寒沙门菌asrC基因启动子缺陷变异株。
5.基因缺陷回补株的制备:利用重组质粒pBAD/gⅢ将lepA基因和pBAD/gⅢ空质粒分别导入asrC基因启动子缺陷变异株，构建lepA基因的缺陷回补株和lepA缺陷空质粒对照株。
6.asrC基因启动子缺失的定量分析:qRT-PCR分析S.Typhi野生株、asrC基因启动子缺陷株中AsrC的水平。
7.生长曲线的测定:制作生长曲线，观察S.Typhi野生株、asrC基因启动子缺陷株、lepA基因缺陷回补株及空质粒对照株在等渗、氧应激、酸应激和高渗应激时的生长状况。
结果:
1.经NorthernBlot和qRT-PCR分析，确定AsrC存在表达，并发现其在对数生长后期（OD6000.8）时AsrC的表达量最高。
2.经过5和3RACE实验鉴定AsrC的分子全长信息，并确定其分子全长为893bp，与lepA基因部分重叠。
3.NorthernBlot和qRT-PCR结果表明，S.TyphiAsrC在酸、氧及高渗应激时的表达量均下降。
4.利用λ-Red系统成功制备S.Typhi包含asrC基因启动子区域500bp的缺陷变异株。
5.PCR及序列分析结果表明，成功构建pBAD-lepA阳性重组质粒，并成功将重组质粒和空质粒pBAD/gⅢ分别导入asrC基因启动子基因缺失变异株中，成功制备lepA基因缺陷回补株和空质粒对照株。
6.qRT-PCR结果显示，与S.Typhi野生株相比，asrC基因启动子缺失变异株中AsrC的水平显著降低。
7.生长曲线分析结果显示，在氧应激时asrC基因启动子缺失变异株生长明显比S.Typhi野生株慢(P＜0.05)，而lepA基因回补株及空质粒株的生长速度与野生株相似;在等渗条件、酸应激和高渗应激时，四种菌株的生长状况相似。
结论:
证实了S.TyphincRNAAsrC的存在，确定了AsrC分子全长信息和基因编码定位，并揭示其能影响S.Typhi在环境氧应激下的生长速度，为深入研究AsrC在S.Typhi中的作用和功能打下良好的基础。