目的:先从小鼠肝组织中克隆ING4 基因并构建真核表达载体pcDNA3.0-ING4, 研究ING4 对人肝癌SMMC7721 细胞、人宫颈癌Hela细胞、人胃癌SGC7901 细胞的作用;再构建原核表达载体pET-21a(+)-ING4 并表达纯化和制备多克隆抗体。方法:采用RT-PCR 技术从小鼠肝组织中克隆ING4 基因,将其构建至pUCm-T 载体上,经测序鉴定正确后,再构建重组表达质粒pET-21a(+)-ING4 和pcDNA3.0-ING4,采用PCR、双酶切和基因测序鉴定。(1) 利用阳离子脂质体Lipofectamine 分别将pcDNA3.0-ING4 转入COS-7细胞、人肝癌SMMC7721 细胞、人宫颈癌Hela 细胞、人胃癌SGC7901细胞。然后分别用RT-PCR、流式细胞仪、激光扫描共聚焦显微镜及Hoechst33258 核染色等方法鉴定ING4 基因的表达和研究其对几种肿瘤细胞的抑制作用,同时还将ING4 和IL-24 对SMMC7721 细胞的作用进行比较。(2) 用氯化钙法将重组质粒pET-21a(+)-ING 转化大肠杆菌BL21(DE3)并用IPTG 诱导表达,用SDS-PAGE 凝胶电泳检测ING4 蛋白表达情况。ING4 原核表达产物经初步纯化后,免疫家兔制备多克隆抗体。结果:RT-PCR 扩增的产物经1.2%琼脂糖凝胶电泳后,可见750bp 大小的DNA 片段,与理论预测结果相符,测序结果与GenBank 报道的序列相比,除有一个碱基发生同义突变外其余均一致,原核和真核重组表达