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本试验以蝴蝶兰花梗及无菌苗叶片为研究材料,开展了类原球茎诱导、增殖、分化等研究,建立了蝴蝶兰组培快繁体系,为蝴蝶兰优良种苗的快速生产以及通过以类原球茎和叶盘为受体实现对蝴蝶兰品质性状的遗传改良的蝴蝶兰转基因研究奠定基础。主要研究结果如下:1、蝴蝶兰花梗无菌培养体系的建立以蝴蝶兰花梗为试材,研究不同品种的花梗所需0.1%升汞消毒的时间,花梗不同部位及不同培养基对腋芽萌发的影响。试验结果表明不同品种的花梗最佳消毒时间不一,可采用消毒时间15min,花梗污染率低,存活率较高;位于花梗中部的花梗腋芽诱导率较高,均达60%以上;促进花梗腋芽萌发的最适培养基为:MS+6-BA 5 mg · L-1+NAA0.1 mg · L-1+sucrose 30g· L -1+AC 1g· L-1,Agar 7.5g · L-1, pH 为 5.6。2、蝴蝶兰PLB诱导体系的建立(1)叶片诱导PLB无菌苗及花梗腋芽萌发的幼叶生长30d左右,叶长为1～2cm,是诱导PLB效果最佳的材料。叶片切割宽度为0.5cm时,三个品种的蝴蝶兰PLB诱导效果均最好。由于蝴蝶兰品种不同,叶片诱导PLB的最佳激素配比存在差异:1474-1与传1叶片诱导 PLB 最佳的培养基为:1/2MS+TDZ 0.2 mg · L-1+6-BA 4 mg · L-1+CW 20%+PVP 3g · L-1+sucrose15g · L-1,其PLB诱导率可达50.43%,每个叶片组织块上诱导出PLB数目值为12.78个;而3206适合较高浓度的TDZ,叶片诱导PLB最适培养基为:1/2MS+TDZ 0.6 mg · L-1+6-BA 4 mg · L-1+CW 20%+PVP 3 g ·L-1+Sucrose15 g · L-1, Phytagel 3 g · L-1, pH=5.5。(2)蝴蝶兰叶片诱导PLB过程中的防褐化10d黑暗预处理后的叶片,褐化率降至为60%,PLB诱导率可达56.67%;添加不同种类和浓度的防褐化剂,均可降低褐化率,添加VC0.4 g·L-1效果最好,褐化率降至47.50%,且PLB的诱导最高;光强1000Lux条件下,PLB褐变率较低,且长势良好。(3)叶片诱导PLB过程中的组织学观察本试验对叶片诱导PLB过程中的各个时期的叶片组织块进行石蜡切片,经观察发现:蝴蝶兰体细胞胚胎为单细胞起源,发生在叶片上表皮细胞或上表皮下方的叶肉细胞,单细胞原胚分裂形成多细胞原胚,后经一系列发育,逐渐脱离母体,最终形成较大颗粒状的PLB。(4)根尖诱导PLB.最适合蝴蝶兰根尖诱导PLB的培养基为:1/2MS+TDZ 0.6m g·L-1+6-BA 4m g · L-1+CW 20%+PVP 3 g · L-1+Sucrose15 g · L-1,Phytage1 3 g · L-1,pH=5.5。1474-1的PLB诱导率为4.33%,3206的PLB诱导率为5.93%。3、PLB的增殖、分化及生根培养本试验中得到最适合蝴蝶兰PLB增殖的培养基为:VW+ZT 5m g · L-1+Ad 5m g · L-1+CW 20%+PVP 3 g · L-1+sucrose 15 g · L-1, Agar 7.5 g · L-1, pH=5.5。最适合蝴蝶兰PLB分化培养的培养基为:花宝+ ZT 3 mg · L-1Ad 5 mg · L-1+CW 20%+PVP 3 g · L-1+sucrose15 g · L-1, Agar 7.5 g · L-1, pH=5.5。最适合蝴蝶兰分化苗生根的培养基为:1/2MS+NAA 1 mg · L-1+IBA 1 mg · L-1+80 g · L-1 香蕉 + sucrose 30 g · L-1,Agar 7.5 g · L-1,pH=5.6 。