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第一部分ISO-MTB快速检测痰液中结核分枝杆菌复合群的应用评估目的:Isothermal MTB Test (ISO-MTB)是一个结合重组酶介导恒温扩增技术和导流杂交技术的新型分枝杆菌分子诊断方法,本课题拟通过对临床痰样本的检测,评估该方法检测分枝杆菌的性能,尤其是评估其对结核分枝杆菌复合群(MTBC)的检测性能,探讨其对结核病的临床诊断应用价值。方法:收集270例临床痰样本(其中117例金胺0荧光染色涂片阳性样本,153例涂片阴性样本),抽提样本DNA,进行ISO-MTB检测。1、以培养法为金标准,计算ISO-MTB对MTBC的检测效能,并与结核菌荧光PCR法相比较,用x2检验或确切概率法对两种方法的差异性进行分析。2、以测序法为金标准,计算该方法检测鸟型分枝杆菌复合群(MAC)的一致率。3、所有样本的ISO-MTB结果均与临床诊断相比较,计算其临床诊断符合率。结果:1.除2例被ISO-MTB检出的混合感染样本外,其余268例样本被用于MTBC检测性能的计算。该方法检测MTBC的总敏感性为92.70% (95%CI,86.99-96.44),其中,涂片阳性样本的敏感性为95.58% (89.98-98.55),涂片阴性样本的敏感性为79. 19% (57. 85-92.87 );总特异性为96. 95%(92. 37-99. 16),其中,涂片阴性样本的特异性为97. 67% (93. 35-99.52)。总阳性似然比为30. 36(11. 55-79. 77),总阴性似然比为0. 08(0. 04-0. 14);总阳性预测值为96.95% (92.37-99.16 ),总阴性预测值为92.70%(86. 99-96. 44)。ISO-MTB与结核菌荧光PCR法检测MTBC的结果差异无统计学意义(p>0. 05)。2.未检出MAC单独感染样本,但检出2例MTBC-MAC混合感染样本。3. ISO-MTB检测结果的临床诊断符合率为94. 05%。结论:ISO-MTB简单、快捷,对痰液中MTBC的检测性能良好,且可提示MTBC-MAC混合感染,有望成为MTBC检测的临床应用新方法。第二部分中国汉族人群白介素17A基因多态性与肺结核易感性的研究目的:研究白介素(IL) 17A基因启动子区域位点rs4711998在中国汉族人群中的基因多态性分布,以探索IL-17A基因多态性与肺结核易感性的关系。方法:选取汉族肺结核患者214例(病例组)和汉族健康个体197例(对照组)作为研究对象。抽提上述研究对象外周血DNA,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测IL-17A基因rs4711998单核苷酸多态性(SNP)位点的基因型分布,并随机抽取部分样本,采用DNA测序法检测上述位点的基因型分布,以验证PCR-RFLP法分型的准确性。用哈-温平衡定律分析所选研究对象的代表性;用x2检验比较病例组和对照组间基因型和等位基因频率分布的差异性;用logistic回归分析计算比值比(OR)和95%可信区间(CI),并以性别和年龄进行校正,对该位点基因多态性和肺结核易感性进行关联分析。结果:1.病例组与对照组基本资料比较:性别和年龄的构成差异无统计学意义(p>0.05),具有可比性。病例组和对照组IL-17Ars4711998位点基因型分布符合哈-温平衡(p>0. 05),所选取的研究对象具有代表性。2. IL-17A rs4711998位点在病例组和对照组中共检测到AA、AG、GG三种基因型,三种基因型及其等位基因频率在两组中的分布差异无统计学意义(p>0. 05)。与AA基因型相比,AG基因型和肺结核的患病风险无相关性(p=0. 995),GG基因型和肺结核的患病风险无相关性(p=0.085),说明尚未发现IL-17A rs4711998位点的基因多态性与肺结核遗传易感性有关。3.性别分层分析:无论在男性人群或是女性人群中,IL-17Ars4711998位点的基因型均与肺结核患病风险无相关性(p>0. 05)。4.年龄分层分析:无论在<40岁或是≥40岁人群中,IL-17A rs4711998位点的基因型均与肺结核患病风险无相关性(p>0. 05)。结论:在中国汉族人群中,尚未发现IL-17A基因rs4711998位点多态性与肺结核易感性相关。