【摘 要】
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棕色脂肪通过快速分解挥发性脂肪酸实现非颤栗性产热,新生羔羊的棕色脂肪主要分布在肾脏的周围,呈棕褐色,富含大量的线粒体,是羔羊刚出生时供能量以维持机体正常体温的重要产热器官。课题组前期研究发现,出生1天羔羊的肾周脂肪为棕色脂肪,随着羔羊的生长发育,棕色脂肪逐渐转变为白色脂肪。Micro RNA(miRNA)是十分保守的一种长度大约为18-23个碱基的非编码单链RNA分子在棕色脂肪的生长发育中起着重要
【基金项目】
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国家重点研发计划(2018YFD0502002);
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棕色脂肪通过快速分解挥发性脂肪酸实现非颤栗性产热,新生羔羊的棕色脂肪主要分布在肾脏的周围,呈棕褐色,富含大量的线粒体,是羔羊刚出生时供能量以维持机体正常体温的重要产热器官。课题组前期研究发现,出生1天羔羊的肾周脂肪为棕色脂肪,随着羔羊的生长发育,棕色脂肪逐渐转变为白色脂肪。Micro RNA(miRNA)是十分保守的一种长度大约为18-23个碱基的非编码单链RNA分子在棕色脂肪的生长发育中起着重要作用。因此对山羊不同时期的肾周脂肪进行miRNA的转录组分析,为进一步研究miRNA在山羊棕色脂肪转换过程中的作用提供理论基础。本试验以三个不同时期的川中黑山羊的肾周脂肪组织为研究对象,利用sRNA-seq技术,建立山羊肾周脂肪miRNA文库;筛选和鉴定了三个不同时期肾周脂肪的miRNA;进一步筛选和鉴定差异表达的miRNA,并通过GO、KEGG对差异表达miRNA进行靶基因预测、注释和信号通路富集分析。研究结果如下:(1)建立三个不同时期共计9个山羊肾周脂肪样品的miRNA文库,共得到161.23 M clean reads;各样品clean reads的Q30>98%;比对到指定参考基因组的map reads覆盖率超过60%。(2)得到240个已知的miRNAs,预测出1893个新的miRNAs,共计2,133个miRNAs。发现共有562个差异表达的miRNAs(DEMs),258个上调DEMs和324个下调DEMs;其中参与棕色脂肪生长发育调控的miRNA有58个,如mi R-27、mi R-455、mi R-193b、mi R-182。(3)随机筛选5个可能参与调控棕色脂肪的已知DEMs和一个新预测的DEM进行q PCR检测,其q PCR和测序结果的趋势相似,其R值均超过0.83,且mi R-29a-3p、mi R-143-3p、mi R-543-3p和NC_030826.1_702331的R值≥0.99。其表明sRNA-seq结果具有可靠性。(4)在得到的2133个miRNAs中,共计1604个miRNAs预测出19752靶基因,其中预测出167个已知miRNAs有12688个靶基因,1437个新预测的miRNAs有19752个靶基因,靶基因总数19752个。KEGG分析发现脂肪酸降解(Fatty acid degradation)、雌激素信号通路(Estrogen signaling pathway)、糖异生和糖酵解(Glycolysis/Gluconeogenesis)、MAPK(Mitogen-activated protein kinase)等参与脂肪生长发育调控的信号通路被差异表达miRNA的靶基因高度富集。综合本试验研究结果,得到参与棕色脂肪发育调控的差异表达miRNA及其靶基因,发现并分析了这些基因在棕色脂肪生长发育过程中的信号通路。这些结果可以为山羊棕色脂肪生长发育相关的miRNA调控机制研究提供理论参考。
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