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中药龙胆具有清热解毒，利胆祛湿的功效。龙胆泻肝汤是治疗湿热黄疸的经典方剂。现代药理学研究表明龙胆苦苷是其主要的药理活性成分，然而其保肝利胆的作用机理尚不明确。 本旨在利用两种胆汁淤积模型探讨龙胆苦苷对胆汁淤积性肝病的保护作用及其利胆、抗炎作用的作用机理，为临床治疗治疗胆汁淤积的药物研发提供理论依据，也为其他含环烯醚萜类中药的研究提供借鉴思路。主要研究内容如下: 1.对龙胆苦苷保肝利胆作用的药效评价: 本文建立了小鼠ANIT肝内胆汁淤积模型与BDL肝外胆汁淤积模型，并利用血清生化指以及肝脏病理切片结果评价不同浓度龙胆苦苷对两种胆汁淤积小鼠的保护作用。结果显示:在ANIT模型中，龙胆苦苷能显著逆转ANIT引起的小鼠血清ALT，AST，TBA，ALP，DBIL以及TBIL升高，改善ANIT引起的肝细胞炎性浸润，坏死;在BDL模型中，龙胆苦苷能显著降低BDL所致的小鼠血清ALT，AST，TBA，TBIL，DBIL和ALP的升高;同时，龙胆苦苷能显著减轻BDL模型中汇管区炎性细胞浸润，降低肝细胞灶性坏死面积并减少胆管增生数量。以上结果表明:龙胆苦苷对于ANIT诱导的小鼠肝内胆汁淤积模型以及BDL诱导的肝外胆汁淤积模型均有良好的保护作用。 2.对龙胆苦苷保肝利胆作用机理研究: 综合运用代谢指纹分析、代谢轮廓分析、定量PCR分析等方法对龙胆苦苷保肝利胆的机理进行研究。 首先，通过UPLC-MS技术，对两种胆汁淤积模型中小鼠血清的各类胆汁酸含量以及临床胆囊息肉，胆结石病人血清中胆汁酸代谢轮廓进行分析，发现两者具有一定的相似性，均表现为牛磺结合型胆酸显著升高，石胆酸含量显著下降，且两类病人的血清总胆酸含量与健康人比较无显著差异，提示胆汁酸代谢轮廓分析法比起传统的血清生化指标TBA测定法能更灵敏地反应肝胆疾病的发生发展。 其次，基于血清胆汁酸带些轮廓分析的结果，我们进一步对两种胆汁淤积模型中，各组小鼠肝脏，肾脏，尿液，粪便中各类胆汁酸的进行定量分析。结果显示:在两种胆汁淤积模型中，与空白组小鼠相比，肝脏，尿液中总胆酸升高，其中TCA，T-βMCA和TCDCA升高变化最显著;龙胆苦苷给药组能显著降低两种胆汁淤积模型导致的小鼠血清，肝脏内大量升高的胆汁酸如TCA，T-βMCA等，且显著增加尿液中排出胆汁酸的含量。以上结果提示:龙胆苦苷对两种胆汁淤积模型的保肝利胆作用可能是通过加速胆汁酸的体循环，使淤积在肝脏，血清中的胆汁酸通过肾脏排入尿液，从而减轻体内胆汁淤积的情况。 再次，采用荧光定量PCR对两种胆汁淤积模型小鼠肝脏，回肠，肾脏中胆汁酸相关代谢基因进行定量检测，结果显示:龙胆苦苷能改善性回调胆汁酸合成，分泌以及重摄取相关基因，且能增强肝脏胆汁酸排泄基因Ost-β，Mrp3的表达，提示这可能成为龙胆苦苷保肝利胆的体内作用靶点。我们进一步采用荧光定量PCR对龙胆苦苷单独给药小鼠肝脏和龙胆苦苷体外刺激大鼠原代肝细胞的胆汁酸相关基因以及上游调控核受体进行定量分析。龙胆苦苷体内外对肝脏胆汁酸排泄基因Ost-β，Mrp3均有显著的促进作用;对上游调控Ost-β以及Mrp3表达的核受体FXR，LXR，龙胆苦苷无显著激动/抑制作用，其对核受体PXR以及CAR的作用有待进一步研究。 3.对龙胆苦苷抗炎机理的初步研究: 采用胆汁淤积模型中，模型组血清、肝脏升高倍数最显著的TCA刺激Raw264.7细胞，并测定炎症相关基因表达。结果显示:TCA能浓度依赖的升高小鼠巨噬细胞Raw264.7内炎症相关基因Tnf-α，Il-6及趋化因子Cxcl-1，Cxcl-2的表达;与此同时，采用RT-PCR技术对两种胆汁淤积模型以及给药小鼠肝脏内炎症相关基因进行分析，结果显示:在两种胆汁淤积模型中，龙胆苦苷治疗组能显著改善肝脏内炎症相关基因Tn-α，Il-6，Il-8以及趋化因子Cxcl-1，Cxcl-2等的表达。我们进一步采用LPS诱导的Raw264.7细胞炎症模型评价龙胆苦苷体外的抗炎活性，发现其对LPS诱导的炎症无显著抑制作用;以上结果提示:龙胆苦苷对ANIT以及BDL诱导的小鼠肝内外胆汁淤积模型中的抗炎作用机理主要是通过加速肝脏内蓄积胆汁酸的清除过程，从而减轻了胆汁酸介导的肝内炎症反应。 综上所述，本文运用了ANIT以及BDL所致的小鼠肝内外胆汁淤积模型，对龙胆苦苷保肝利胆作用进行了系统性评价，并从胆汁酸代谢轮廓的角度结合相关胆汁酸代谢基因以及上游的核受体对其保肝利胆作用机理进行研究。结果表明，龙胆苦苷对两种胆汁淤积模型均有良好的保护作用，其保肝利胆机制主要与上调胆汁酸外排基因Ost-β以及Mrp3的表达，从而加速淤积在肝脏内胆汁酸进入体循环，通过肾脏形成尿液排出体外有关。此外，对于龙胆苦苷在两种模型中的抗炎机理也做了初步探索，发现龙胆苦苷在两种胆汁淤积模型中的抗炎作用可能是间接产生的，即龙胆苦苷体内通过加速肝脏内蓄积胆汁酸的清除过程，从而减轻了蓄积的胆汁酸介导的肝内炎症反应。