无梗五加果黄酮类化合物提取分离及抗氧化活性研究

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无梗五加(Acanthopanax sessiliflorum)又叫乌鸦子,既可以用来供人观赏,又是一种保健效果好、作用全面的健康作物,也是一种营养丰富的野菜资源。近些年来,民间不断有将它代替刺五加入药的报道,其效果与刺五加不相上下,是一种很好的替代性药用资源。黄酮类化合物是普遍存在于生物界中的具有消除自由基、抗氧化、抗肿瘤、降血糖、抑制酶活性、抵御癌症、降低病毒含量、抑制细菌生长、缓解糖尿、预防心血管类疾病、更年期妇女症状等多种功能的活性物质。无梗五加果就是一种黄酮种类和含量非常丰富的植物,其多种药用价值均与这一因素有关。本试验对无梗五加果中黄酮类化合物整体的提取、纯化、分离、鉴定以及其抗氧化活性进行了进一步的研究。结果如下:1、在单因素试验基础上,采用响应面法对无梗五加果黄酮类化合物超声波提取工艺进行了参数的优化,并结合实际实验操作条件,最终确定最优的操作工艺参数为:乙醇浓度30%,料液比为1:50,提取时间为40min。将试验平行重复三次,实际提取含量为(54.2124±0.3458)mg/g,达到预期值的99.71%。2、采用大孔树脂法对无梗五加果黄酮类化合物进一步纯化。通过对静态吸附解吸试验的比较分析发现,型号为HPD-600的大孔树脂对无梗五加果黄酮不仅吸附率最高,达(52.06±0.033)%,并且解吸率也较高,达(73.98±0.032)%,所以选取该型号为最优树脂。从上样流速、上样体积、上样液浓度、解吸液浓度、解吸液体积、解吸液流速六个方面对HPD-600大孔树脂纯化无梗五加果黄酮类化合物的工艺条件进行优化,最终确定最优纯化工艺条件为:上样流速为1.0mL/min,上样体积为120mL,上样浓度为0.6mg/mL,解吸液浓度为体积分数为70%的乙醇,解吸液体积为100mL,解吸液流速为1 mL/min.3、将树脂纯化后的无梗五加果黄酮类化合物以水溶解,采用乙酸乙酯进一步将其黄酮组分进行分离,测定结果表明,黄酮类化合物主要集中在乙酸乙酯层(173.96±1.32)mg/g,远高于水层中黄酮类化合物的含量(36.79±0.72)mg/g,且水层中黄酮类化合物主要以含C5位羟基的花色苷为主,而乙酸乙酯层中的黄酮类化合物不包括花色苷类。利用高效液相色谱法以标准品对照分析其黄酮类组成主要成分为芦丁、金丝桃苷、槲皮素,通过液质连用技术进一步分析其组成,结果表明其还含有绿原酸、会丝桃苷、二咖啡酰奎宁酸和奎宁酸类化合物。花色苷类化合物可能为含有锦葵色素花色苷元的花色苷。4、通过测定树脂纯化后的无梗五加果黄酮类化合物、蓝莓果黄酮类化合物、苹果黄酮类化合物对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基、ABTS自由基的清除能力,研究无梗五加果黄酮类化合物抗氧化能力的大小。结果表明,无梗五加果黄酮类化合物的抗氧化活性最高,其DPPH自由基清除能力的IC50值为27.44μg/mL,超氧阴离子自由基清除能力的IC50值为24.21μg/mL,羟基自由基清除能力的IC50值为10.49μg/mL, ABTS自由基清除能力的IC50值为(5.26±0.13) mmol/g.
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