肺移植作为器官移植的一个重要组成部分，被看作是治疗终末期肺部疾病的有效方法之一。长期以来，急性和慢性排斥反应一直成为困扰肺移植的一道难题，抗免疫排斥药物的选择及应用至关重要。 产于我国南方的中草药雷公藤及其衍生物具有抗免疫排斥中的作用，其应用愈来愈受到人们重视。现有的研究证实雷公藤多甙在移植免疫中通过抑制T细胞的活性以及下调IL-2的表达来发挥其免疫抑制作用。雷公藤多甙在肺移植中对移植免疫排斥反应的影响未见报道。 本研究拟通过建立犬肺移植动物模型，并给予雷公藤多甙作为抗免疫排斥治疗，观察雷公藤多甙对犬同期单肺移植免疫排斥反应的影响。 实验一 雷公藤多甙对犬单侧移植肺病理改变影响的 实验研究 目的：模拟临床肺移植的步骤及过程，建立肺移植的动物模型，观察移植后移植物的病理改变，以及雷公藤多甙对其产生的影响。方法：①实验动物分组，将西安地区成年健康杂种犬40只随机分为4组，A组为同种异体肺移植组；B组为同种异体肺移植，使用环孢素A抗免疫排斥治疗；C组为同种异体肺移植，使用雷公藤多甙抗免疫排斥治疗D组为同种异体肺移植，使用环孢素A联合雷公藤多甙抗免疫排斥治疗；②将实验犬模拟进行同期肺移植手术；③分别给予不同抗免疫排斥药物治疗，观察移植后免疫排斥反应的表现，观察移植物的存活时间以及病理组织学改变。结果：A组（对照组）存活时间最短，B组（CsA组）、C(T_Ⅱ组)较对照组存活时间有所延第四军医大学硕士学位论文长，平均时间为5一10天，D组（CSA+T】，组）存活时间最长;A组（对照组）排斥反应最严重，移植肺的病理改变为:光镜下可见肺泡腔内大量的炎细胞浸润，部分出血、肿胀、坏死;实验B组移植肺的表面有轻度淤血，未见出血、脓肿、坏死，将其剖开后发现有部分灶性坏死，小血管周围可见大量的单核细胞及淋巴细胞浸润，部分小血管内有凝血块形成;实验C组同实验B组大体上观察无明显区别;实验D组移植物外观呈现淡淡的灰红色，同对侧健肺基本相似，电镜下可见部分肺泡上皮细胞变性坏死，肺泡腔内可见单核淋巴细胞及少量巨噬细胞，存活时间长的移植肺肺泡腔内有胶原蛋白形成，排斥反应程度最轻，肺组织结构基本正常。结论:雷公藤多贰联合小剂量的环抱素治疗可以明显延长移植物的存活时间;同时可以在一定程度上抑制移植免疫排斥反应。实验二雷公藤多贰对犬肺移植模型外周血血清中TNFesa、IL一、IL--6 表达影响的实验研究 目的:我们在实验一成功建立犬的动物试验模型基础上，检测移植物移植后不同时间外周血血清中TNF一、IL一2、IL一6表达水平，观察不同抗免疫排斥药物对其表达的影响。为临床肺移植后排斥反应的监测及治疗提供实验依据。方法:分别于手术前ld、术后第3、5、7、10d抽取动物的外周血，即刻以5400rpm离心15min后，收集分离血清，将标本对应编号后，置于一70℃冰箱保存;TNF一、IL一2、IL一6表达水平的检测使用我校免疫教研室提供的检测试剂盒，采用双抗体夹心EL工SA方法测定TNF一 IL一2、IL一6表达值。结果:①移植后各组TNF^a表达均较移植前升高（P<0.05），但是各实验组和对照组之间比较无统计学意义（P>.05）。②移植后各组工L一2、IL一6表达均较移植前升高，第3页共65页第四军医大学硕士学位论文对照组明显升高，实验A、B组升高幅度较对照组为小（P<0.05），实验C组IL一6表达的变化最小（P>.01）。结论:T:，可能通过抑制IL一2、IL一6表达减低了T细胞的活性起到抗免疫排斥的作用。 实验三雷公麟多贰对移植肺组织中CD44分子表达影响的实脸研究目的:了解雷公藤多贰对移植肺抗免疫排斥的作用途径，观察其对移植肺组织中CD44分子表达的影响。方法:各组实验动物分别在移植后第3、5、7天采集取新鲜移植肺组织标本;采用移植肺石蜡切片免疫组化染色一SABC法，光镜下从染色强度和阳性细胞的细胞比例两方面评价染色结果。结果:CD44分子免疫阳性的细胞膜呈棕黄色或深棕色，胞浆无着色。CD44表达阳性的标本例数为21/40（53%）。在对照组（A组）有8八O例（80%）表达阳性;B组有5/10例（50%）表达阳性;C组有4/10例（40%）表达阳性;D组有3/10例（30%）表达阳性，明显的低于对照组，差异非常显著（P<0.01）。结论:cD44分子位于细胞膜上，着色后呈现为棕黄色;T:r联合小剂量CSA可以抑制移植肺组织中CD44分子表达。 小结1、采用T:，联合CsA作为抗免疫排斥药物在犬肺移植实验中移植肺存活时间最长，术后并发症较少。2、TNF一。、IL一2、IL一6表达同排斥反应的程度密切相关:TNF一 IL一2、IL一6可以作为监测移植物早期急性排斥反应的血清标志物;T:，可能通过抑制IL一2、IL一6的表达起到抗免疫排斥的作用。3、T:r联合小剂量CsA可以抑制移植肺组织中CD44分子表达，达到抗免疫排斥的目的。