目的:1、探讨EV71病毒(Gen Bank:JQ804832)与自噬相关性2、进一步探讨病毒蛋白与自噬相关性。方法:1、EV71对293T细胞的影响:用Reed-Muench法计算出病毒的TCID50,将293T细胞分为抑制剂+EV71组、诱导剂+EV71组、EV71感染组,未感染组,将3-MA与雷帕霉素作用1小时后,感染5moi EV71病毒,8小时后处理细胞,用Westen Blot方法检测293T细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的变化及P62的变化情况及用免疫荧光的方法检测点片状绿色荧光的形成情况。2、EV71病毒蛋白对293T细胞的影响:应用基因工程建立11种真核表达的重组质粒,分别为pc DNA3.1(+)-HA-VP1、pcDNA3.1(+)-HA-VP2、pcDNA3.1(+)-HA-VP3、pcDNA3.1(+)-HA-VP4、pcDNA3.1(+)-HA-2A、pc DNA3.1(+)-HA-2B、pc DNA3.1(+)-HA-2C、pcDNA3.1(+)-HA-3A、pc DNA3.1(+)-HA-3AB、pcDNA3.1(+)-HA-3C、pc DNA3.1(+)-HA-3D,经同步双限制性内切除的方法验证及测定质粒序列,正确后,将重组成功的质粒各自同自噬检测标志物(p EGFP-LC3)一同瞬时转染至293T细胞中,用免疫荧光的方法察看绿色荧光点状聚积及计数,免疫荧光激光共聚焦显微镜查看LC3和EV71蛋白共定位,同时用Western Blot检测LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的变化及P62的变化情况。结果:在EV71感染已转染pEGFP-LC3质粒的293T细胞中,可以看到,有点片状的绿色荧光出现,且两者表现出共定位。P62蛋白表达量出现降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值有所增加。将pc DNA3.1(+)-HA-VP1等11种病毒蛋白分别与pEGFP-LC3共转染到293T细胞中,在转染VP1与2A的细胞中可以看到多个明亮的绿色点片状荧光,且western blot检测到其LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高,p62蛋白水平的下降。结论:EV71病毒有诱导自噬的作用,病毒结构蛋白VP1与非结构蛋白2A可以引起细胞自噬。