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目的临床发现冠心病患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术后心肌组织会发生更严重的结构功能变化,称心肌缺血/再灌注损伤(Myocardial Ischemia-reperfusion Injury,MI/RI)。已有研究发现电针预处理可以减轻MI/RI,但机制尚未完全明确,导致针刺防治MI/RI的临床推广及应用受限。相关研究表明,MI/RI的发生发展与心室重构密切相关,其中包括心肌重构与交感神经重构两个方面。本课题组选用心肌缺血再灌注模型大鼠为研究对象,依据针灸“治未病”理论,运用免疫组化及蛋白质印迹等技术,观察标本配穴电针预处理对大鼠心肌及交感神经重构的影响,探讨“标本配穴”电针预处理对MI/RI的保护作用及效应机制,旨在为针灸“标本配穴”预防和减轻MI/RI提供实验依据。方法1.选取3月龄SPF级雄性Wistar大鼠40只,适应性喂养1周后根据随机数字表分为4组:假手术组(sham operation group,SO组)、模型组(myocardial ischemia/reperfusion injury group,MI/RI组)、内关电针预处理组(MI/RI+PC6组)和标本配穴电针预处理组(myocardial ischemia reperfusion group with acupuncture pretreatment on Neiguan,Zusanli and Guanyuan,MI/RI+AP组),每组10只。2.所有大鼠每天同时捆绑,每次捆绑时间为20min,连续7天。SO组与MI/RI组大鼠只捆绑不针刺,MI/RI+PC6组与MI/RI+AP组大鼠在每天捆绑的同时进行电针预处理治疗:MI/RI+PC6组针刺大鼠双侧“内关”穴,旁开0.3cm处皮下再浅刺一针作“内关”辅助电极;MI/RI+AP组针刺大鼠双侧“内关”、“足三里”及“关元”穴,同侧“内关”与“足三里”穴组成一对电极,“关元”穴旁开0.3cm处皮下再浅刺一针作“关元”穴辅助电极。连接HANS-200电针仪,输出波型选连续波,频率为2Hz,强度为1mA,定时20min/次,共针刺7天。3.实验第8天所有大鼠均行开胸手术,除SO组外所有大鼠左心耳和肺动脉根部下方2mm处穿缝线结扎阻断左冠状动脉前降支,造成左室前壁心肌缺血20min,再松线恢复冠脉血供,形成再灌注40min,造MI/RI模型,SO组大鼠只于左冠状动脉前降支穿过缝线不结扎。采用BL-420生物机能实验系统观测每组大鼠ST段电压振幅变化,以MI/RI组大鼠为例,如果结扎左冠状动脉前降支后心电图Ⅱ导联ST段出现弓背上抬>0.2mV、松线后抬高的ST段明显回落,标志缺血再灌注模型造模成功。4.观察实验及造模期间各组大鼠死亡情况,计算大鼠死亡率,并在造模成功后对大鼠进行腹主动脉采血及心脏取材,用化学荧光法和生化法分别检测各组大鼠的氧化应激反应标志物活性氧(ROS)含量与谷胱肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,Masson染色观察心肌胶原纤维形态分布并计算胶原容积分数(CVF),免疫组化检测结缔组织生长因子(CTGF)表达及酪氨酸羟化酶(TH)阳性纤维分布,采用蛋白质印迹法检测生长相关蛋白43(GAP43)的表达,并对数据进行统计和分析。结果1.(1)死亡率:与SO组比较,MI/RI组大鼠死亡率显著上升(P<0.01);MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组死亡率低于MI/RI组,但差异不具有统计学意义(P>0.05)。(2)心电图ST段电压变化:与SO组比较,MI/RI组大鼠冠脉结扎20min后ST段电压极显著性上升并>0.2mV(P<0.01),再灌注40min后ST段极显著性上升(P<0.01);与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组大鼠结扎冠脉20min后ST段电压均极显著下降(P<0.01),再灌注40min后ST段均极显著回落(P<0.01);与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠冠脉结扎20min后ST段电压明显下降(P<0.05),再灌注40min后ST段电压显著回落(P<0.05)。(3)氧化应激反应标志物含量:与SO组比较,MI/RI组大鼠心肌组织ROS含量极显著性上升(P<0.01),血清GSH-PX活力极显著性下降(P<0.01);与MI/RI组大鼠比较,MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组大鼠心肌组织ROS含量均显著下降(P<0.05),GSH-PX活力均显著上升(P<0.05);与MI/RI+PC6组比较:MI/RI+AP组大鼠心肌组织ROS含量显著下降(P<0.05),GSH-PX活力显著上升(P<0.05)。2.(1)心肌组织CTGF表达:与SO组比较,MI/RI组大鼠CTGF表达极显著升高(P<0.01);与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠CTGF表达显著下降(P<0.05),MI/RI+AP组大鼠CTGF表达极显著下降(P<0.01);与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠CTGF表达显著下降(P<0.05)。(2)心肌组织形态学比较:心肌组织Masson染色后,与SO组比较,MI/RI组大鼠心肌明显受损,肌丝排列散乱间隙增宽,胶原纤维增粗并呈网状紊乱分布,纤维化明显;与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠肌丝排列较整齐,仅少量增生胶原纤维,部分纤维化;MI/RI+AP组大鼠心肌组织病理变化程度较MI/RI+PC6组大鼠进一步减轻。(3)CVF比值:与SO组比较,MI/RI组大鼠CVF极显著升高(P<0.01);与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠CVF显著降低(P<0.05),MI/RI+AP组大鼠CVF极显著降低(P<0.01);与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠CVF显著降低(P<0.05)。3.(1)TH阳性纤维密度:与SO组比较,MI/RI组大鼠TH阳性纤维密度极显著升高(P<0.01);与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组大鼠TH阳性纤维密度显著降低(P<0.05),MI/RI+AP组大鼠TH阳性纤维密度极显著降低(P<0.01);与MI/RI+PC6组比较,MI/RI+AP组大鼠TH阳性纤维密度极显著降低(P<0.01)。(2)GAP43蛋白灰度值比值含量:与SO组比较,MI/RI组GAP43表达极显著性升高(P<0.01);与MI/RI组比较,MI/RI+PC6组GAP43表达显著降低(P<0.05),MI/RI+AP组GAP43表达极显著性降低(P<0.01),MI/RI+PC6组和MI/RI+AP组GAP43蛋白表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.对氧化应激及心电图ST段振幅的影响:电针预处理可以降低ST段弓背上抬及回落,通过减少心肌组织ROS含量,提升GSH-Px活力,抑制氧化应激反应,起到抗氧化应激损伤的作用,对MI/RI模型大鼠心脏进行有效预防保护,且标本配穴较内关单穴疗效更佳。2.对心肌重构的影响:电针预处理能抑制CTGF的表达、降低CVF比值、减少胶原纤维含量,改善心肌组织形态,减轻心肌组织纤维病理化改变,从而有效保护心肌,且标本配穴较内关单穴效应更佳。3.对交感神经重构的影响:电针预处理能抑制GAP43表达,减少交感神经的过度萌出,改善TH阳性纤维的分布密度,减少因不均一性重构导致的继发性电生理改变来防治MI/RI,且标本配穴较内关单穴疗效更佳。