近年来研究表明,β-淀粉样蛋白是构成阿尔茨海默病主要病理学改变的老年斑的主要成分,β-淀粉样蛋白形成斑块是疾病发生发展过程中的中心环节。为了更深入地研究β-淀粉样蛋白的特性,我们构建了人β-淀粉样蛋白的pGEX-4T-1-Aβ₄₂重组质粒,在大肠杆菌原核表达系统中进行表达,并对表达的融合蛋白进行了纯化、鉴定、酶切以及酶切后β-淀粉样蛋白单体的初步生物学活性分析。从人神经瘤母细胞SH-SY5Y中提取总mRNA,通过反转得到与之互补的cDNA,参照基因库中Aβ₄₂的基因序列和酶位点序列,设计了一对特异性引物,利用RT-PCR方法,扩增Aβ₄₂基因,通过限制性内切酶BamHⅠ和SalⅠ分别对扩增产物和载体进行酶切,将目的基因定向克隆到pGEX-4T-1载体中,构建重组质粒pGEX-4T-1-Aβ₄₂,对重组质粒进行双酶切等初步鉴定后并进行序列测定。结果显示,目的基因成功插入到pGEX-4T-1载体中,克隆得到的基因与GeneBank数据库中Aβ₄₂的序列一致。为了提高Aβ₄₂在大肠杆菌中的可溶性表达,我们考察了诱导剂IPTG浓度、诱导温度、诱导时间以及超声条件等对大肠杆菌中可溶性GST-Aβ₄₂融合蛋白表达及产率的影响。结果表明,大肠杆菌在37°C培养4 h后,以终浓度为1 mmol/L的IPTG在25°C下继续诱导培养2 h,可促进GST-Aβ₄₂融合蛋白的可溶性表达;表达产物经Glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE表明融合蛋白分子量约为32 kD,与预期的GST-Aβ₄₂分子量大小一致;Western Blot杂交进一步分析表明该融合蛋白能分别与GST抗体和Aβ₄₂抗体反应,证实纯化得到的是GST-Aβ₄₂融合蛋白。利用凝血酶对纯化后的GST-Aβ₄₂融合蛋白进行酶切,酶切产物先后经Glutathione Sepharose 4B亲和柱和苯甲脒柱结合分别去除酶切下的GST蛋白和凝血酶,得到的产物通过Tricine-SDS-PAGE电泳,显示其分子量约为4.5 kD,与预期的Aβ₄₂单体一致;Western Blot杂交显示该蛋白能与Aβ₄₂抗体反应,而不与GST抗体反应,表明所得到的蛋白即为Aβ₄₂。在此基础上,通过细胞增殖实验、Hoechst 33342-PI双染色和硫磺素-T荧光分析,老化后的重组Aβ₄₂蛋白表现出较强的生物学聚集及细胞毒性特性。本研究的实验结果为大量生产重组人β淀粉样蛋白以及阿尔茨海默病的进一步基础及临床研究提供了物质和技术保障。