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背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元是初级感觉传入神经元,是各种躯体及内脏感觉信息传导的通路,并对感觉信息进行加工和整合。周围局部环境的化学物质(如GABA、SP、ATP等)可改变DRG神经元外周端末梢的功能状态,如膜电位水平、兴奋性等。研究发现:DRG神经元胞体可合成、释放这些化学物质,并且膜上分布有GABAA、SP、ATP等受体,那么这些初级传入神经递质是如何影响DRG神经元膜功能,这些功能改变又是如何影响躯体及内脏感觉系统感觉信息的传递呢?我们应用细胞内微电极技术观察GABA、SP、ATP对SD大鼠DRG神经元膜电位及动作电位的影响,以及给予坐骨神经外部低频刺激对GABA介导的DRG神经元去极化的调制作用。所得结果如下:
1、 SP对DRG神经元膜电位的影响灌流SP(10<-8>~3×10<-6> mol/L)可使部分DRG神经元(42.9%,18/42)产生具有浓度依赖性的去极化反应。SP介导膜去极化反应的阈浓度是10<-8>mol/L,EC<,50>约为3×10<-7> mol/L,饱和浓度是3×10<-6> mol/L。SP引起去极化时,所测膜电导有所增加,并随SP浓度的增大而增加。
2、 ATP对DRG神经元膜电位的影响大多数DRG神经元(84.5%,224/265)对外加ATP敏感。灌流ATP引起三种形式的去极化,即:快速激活快速失活型(fast type,F型)、快速激活缓慢失活型(intermediate type,I型)和缓慢激活缓慢失活型(slow type,S型)。三者的去极化上升相(rising phase, R)从10%至90%的时间(R<,10-90>)有显著差异(P<0.05);去敏感相(desensitizing phase)从10%至90%的时间(D<,10-90>)也有显著差异(P<0.05)。三种类型的膜去极化所占比例分别为:F型1.8%(4/224)、 I型4.6%(10/224)和S型93.6%(210/224)。
灌流ATP(5×10<-5>~10<-2>mol/L)可引起DRG神经元浓度依赖性的去极化(主要为S型)。阈浓度为10<-4> mol/L,EC<,50>值约为2×10<-3>mol/L,饱和浓度为10<-2>mol/L。ATP引起膜去极化幅值可随给药时间延长而增强,持续给药4 min可达最大去极化幅值,且不再随给药时间延长而增强。P2X<,3>/P2X<,2/3>受体拮抗剂TNP-ATP(10<-5> mol/L)可部分拮抗ATP介导的膜去极化。ATP引起去极化时,所测膜电导有所增加,并随ATP浓度增大而增加。
3、 ATP对DRG单个神经元的动作电位的影响在检测的63个神经元中,平均传导速度9.68±0.40 m/s,范围在2.52 m/s~20.00 m/s之间,均属于A类神经元。依据动作电位波型特征又可分为F、H型神经元,所占比例为74.60%、25.40%(47/63,16/63)。
在所测F类神经元上持续灌流5×10<-3> mol/L ATP 5 min后,膜电位(membrane potential,MP)从-56.00±3.10 mV去极化到-43.10±3.74 mV;动作电位峰值(amplitude of action potential,APA)从65.30±2.73 mV下降至20.10±2.51 mV;动作电位最大上升速度(maximum velocity,Vmax)从117.35±12.60 m/s降至49.12±13.40 m/s,动作电位超射消失(n=4,P<0.05);与BSS液替代组(n=9)相比差异有显著性(P<0.05)。ATP对动作电位时程APD<,50>及传导速度(conduction velocity,CV)则无影响(n=4,P>0.05)。
4、外部低频刺激对GABA介导DRG神经元膜去极化的影响外部低频刺激可对GABA介导的去极化具有明显的调制作用。改变刺激频率可延长外部刺激对GABA介导的去极化的抑制作用时间,改变刺激波宽可增强外部刺激对GABA介导的去极化抑制作用。当刺激参数为:5 ms、5 Hz、2 V时,对GABA(10<-4> mol/L)介导的膜去极化抑制率为38.7%,抑制时间长达90 min左右(n=5,P<0.05)。
结果提示:DRG神经元膜上存在有SP、ATP、GABA受体,外部化学物质刺激可以影响DRG神经元外周末梢的功能。SP可能通过开放非选择性阳离子通道从而影响DRG神经元膜的兴奋性;ATP通过与P2X<,2/3>-R结合开放非选择性阳离子通道,使得A类神经元膜预先去极化,引起膜钠通道部分关闭,动作电位幅值降低,斜率Vmax减小,使神经末梢递质释放减少,其作用与GABA介导的突触前抑制类似。给予坐骨神经外部低频刺激通过抑制GABA介导的“突触前抑制”,易化感觉信息的传入。