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目的:探索祛风活血丸含药血清对光感受器间维生素A类结合蛋白(Interphotoreceptor retinoid-binding protein,IRBP)干预下大鼠视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞凋亡的抑制作用,观察祛风活血丸含药血清对IRBP干预下大鼠RPE细胞Fas和Fas L表达的影响。从细胞生物学角度探讨祛风活血丸治疗葡萄膜炎(uveitis)的作用机制,为祛风活血丸治疗葡萄膜炎提供实验依据。方法:(1)选用成年健康无眼疾Lewis雄性大鼠眼球,酶消化法获取RPE原代细胞,进行原代培养及传代,观察细胞生长状况,采用Cytokeratin-8特异性抗体免疫荧光法对细胞进行鉴定。(2)选用成年健康大鼠40只,雌雄不限,体重240g左右,随机分成空白组、祛风活血丸2.5倍组(低剂量组)、祛风活血丸5倍组(中剂量组)和祛风活血丸10倍组(高剂量组)共4组,分别用蒸馏水和祛风活血丸悬浮液进行灌胃,2次/天,灌胃7天后,腹主动脉取血,获取空白血清和低、中、高祛风活血丸含药血清。(3)CCK-8法测定不同浓度祛风活血丸含药血清或空白血清培养的大鼠RPE细胞及不予以处理的大鼠RPE细胞的吸光度值(OD),观察不同浓度含药血清对大鼠RPE细胞活性的影响,选择最佳作用于大鼠RPE细胞的血清浓度。(4)将实验分成空白对照组、模型组2组,模型组采用IRBP刺激RPE细胞,模拟体外葡萄膜炎环境,ELISA法检测各组大鼠RPE细胞的细胞因子IL-6在干预前及干预后6、12、24、36、48h各时间点的表达。(5)将实验分成空白对照组、正常血清组、模型组、治疗组4组,流式细胞术检测各组大鼠RPE细胞的凋亡率,观察祛风活血丸含药血清对IRBP干预下大鼠RPE细胞凋亡率的影响。(6)将实验分成空白对照组、正常血清组、模型组、治疗组4组,ELISA、PCR法检测各组大鼠RPE细胞Fas、Fas L蛋白、m RNA表达情况,观察祛风活血丸含药血清作用后Fas、Fas L在大鼠RPE细胞中的表达。结果:(1)成功培养大鼠RPE细胞。(2)成功制备含药血清,选择5倍的含药血浆作为实验的干预浓度。(3)流式细胞术检测各组细胞凋亡率,正常血清组与空白对照组RPE细胞凋亡率基本持平,差异无统计学意义(P>0.05);模型组、治疗组分别与空白对照组比较,RPE细胞凋亡率明显增加,差异有显著统计学意义(P<0.01);治疗组与模型组比较RPE细胞凋亡率显著降低,差异有显著统计学意义(P<0.01)。(4)ELISA法检测各组细胞Fas、Fas L蛋白含量,正常血清组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05);模型组、治疗组与空白对照组比较RPE细胞中Fas、Fas L蛋白表达均明显增高,差异有显著统计学意义(P<0.01);治疗组与模型组比较RPE细胞中Fas、Fas L蛋白表达显著降低,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。(5)PCR法检测Fas、Fas L中m RNA含量,空白对照组与正常血清组相比差异无统计学意义(P>0.05);与空白对照组比较,模型组Fas、Fas L m RNA差别有显著统计学意义(P<0.01),治疗组Fas m RNA差别有统计学意义(P<0.05),治疗组Fas L m RNA差别有显著统计学意义(P<0.01);与模型组比较,治疗组Fas、Fas L m RNA差别有显著统计学意义(P<0.01)。结论:祛风活血丸含药血清能抑制IRBP作用下大鼠RPE细胞的凋亡。其机制之一是祛风活血丸可抑制Fas、Fas L蛋白的表达,使Fas/Fas L构成比降低。