论文部分内容阅读
目的:外源基因导入表达载体后可在原核或真核系统表达出目的蛋白,应用针对该蛋白的特异抗体可从数目庞大的cDNA文库中免疫筛选出目的蛋白的编码基因或片段。用抗肿瘤单克隆抗体对肿瘤细胞的cDNA文库进行免疫筛选获得的目的蛋白编码基因或片段,十分有助于在分子水平上揭示肿瘤细胞发生、发展、侵袭、转移等生物学行为的机理和规律;其中与肿瘤细胞无限增殖有关的相关蛋白分子编码基因的克隆具有更为积极的意义,可以为恶性肿瘤的免疫诊断和免疫治疗开拓出广阔的应用前景。抗人肺癌单克隆抗体N-35能特异地识别多种恶性肿瘤细胞不同分子量的蛋白组分,但与正常组织细胞不发生反应,因此采用抗人肺癌单克隆抗体N-35,对其相应的抗原基因进行克隆和鉴定具有重要意义。方法:利用抗肿瘤单克隆抗体N-35对构建于表达载体λgt11中的小细胞肺癌细胞H128cDNA文库进行原核系统表达的免疫学筛选,对获得的阳性克隆进一步亚克隆后行PCR和Western blot鉴定。结果:获得42个能与N-35特异反应的阳性克隆,对其中1个亚克隆后进行PCR,经测序知其cDNA插入片段长1262bp。在GenBank中经序列比较与人蛋白磷酸酶2(原称蛋白磷酸酶2A)的催化亚基,α同功型基因有99%的同源性。Western blot证实该片段的表达产物依然保持同N-35反应的特异性。结论:本实验研究获得了肺癌相关性抗原的cDNA基因片段,该片段与人类蛋白磷酸酶2(原称蛋白磷酸酶2A)的催化亚基、a同功型基因高度同源:该基因的突变及其编码蛋白质的糖基化可能与肿瘤的发生有关。发现了用研陀stem blot鉴定用免疫学方法筛选文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法。