肺癌相关性抗原基因的克隆与鉴定

来源 :昆明医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yoyoyu2008
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:外源基因导入表达载体后可在原核或真核系统表达出目的蛋白,应用针对该蛋白的特异抗体可从数目庞大的cDNA文库中免疫筛选出目的蛋白的编码基因或片段。用抗肿瘤单克隆抗体对肿瘤细胞的cDNA文库进行免疫筛选获得的目的蛋白编码基因或片段,十分有助于在分子水平上揭示肿瘤细胞发生、发展、侵袭、转移等生物学行为的机理和规律;其中与肿瘤细胞无限增殖有关的相关蛋白分子编码基因的克隆具有更为积极的意义,可以为恶性肿瘤的免疫诊断和免疫治疗开拓出广阔的应用前景。抗人肺癌单克隆抗体N-35能特异地识别多种恶性肿瘤细胞不同分子量的蛋白组分,但与正常组织细胞不发生反应,因此采用抗人肺癌单克隆抗体N-35,对其相应的抗原基因进行克隆和鉴定具有重要意义。方法:利用抗肿瘤单克隆抗体N-35对构建于表达载体λgt11中的小细胞肺癌细胞H128cDNA文库进行原核系统表达的免疫学筛选,对获得的阳性克隆进一步亚克隆后行PCR和Western blot鉴定。结果:获得42个能与N-35特异反应的阳性克隆,对其中1个亚克隆后进行PCR,经测序知其cDNA插入片段长1262bp。在GenBank中经序列比较与人蛋白磷酸酶2(原称蛋白磷酸酶2A)的催化亚基,α同功型基因有99%的同源性。Western blot证实该片段的表达产物依然保持同N-35反应的特异性。结论:本实验研究获得了肺癌相关性抗原的cDNA基因片段,该片段与人类蛋白磷酸酶2(原称蛋白磷酸酶2A)的催化亚基、a同功型基因高度同源:该基因的突变及其编码蛋白质的糖基化可能与肿瘤的发生有关。发现了用研陀stem blot鉴定用免疫学方法筛选文库得到的阳性克隆是否真实可靠的方法。
其他文献
根据居群遗传学原理对须弥红豆杉的广大分布区居群调查,共调查了24个居群,662个个体,调查时记录经纬度及海拔高度,测量每株胸径。须弥红豆杉分布在海拔320-3 050 m的范围内,
导出了表达三维切削变形的切削方程式;以实验验证,它们的一致性是好的。
加气混凝土砌体的薄层砌筑将灰缝控制在3mm~5mm,不仅能大幅减少热桥提高保温性能,而且外观质量好,表面平整度高,能降减少粉刷砂浆用量。探讨了薄层砂浆砌筑的规范要求及施工
前言 p16基因位于9p21染色体,是一种肿瘤抑制基因,特异地抑制周期素依赖激酶4/6(CDK4/6),阻止细胞进入增殖周期。p16在多种人类肿瘤细胞中均有缺失或突变,近两年的研究更发现5′Cp
目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN的突变及其蛋白表达在子宫内膜癌致病机制中作用,以及与子宫内膜癌临床病理参数的关系,从两种不同检测水平探索PTEN基因突变及蛋白表达的关系,期望能
将水性环氧树脂和一定的助剂配制成水性上浆剂,然后对碳纤维进行上浆处理,通过对上浆后纤维表观形态、耐磨性、摩擦后纤维表面毛羽、纤维集束性、纤维束的拉伸断裂强度等进行
本文用高效液相色谱(HPLC)和薄层色谱(TLCS)法测定了酸枣仁药材中的皂苷A。两种方法回收率均在96%以上,结果基本一致,且稳定性、重现性好,可为酸枣仁药材的含量测定及质量控
目的:研究弥漫性甲状腺肿伴甲亢(Graves disease,GD)、甲亢性眼病(Graves’ophthalmopathy,GO)、甲亢性心脏病(hyperthyroid heart disease,HHD)患者血清25-(OH)D3水平与甲状
葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT1)为易化葡萄糖跨膜转运蛋白,负责组织细胞基础糖摄取。众多免疫组化研究表明GLUT1在正常及良性上皮肿瘤组织中不表达,在恶性肿瘤组
跌打损伤多会引起筋骨伤损、瘀血肿痛、气血不和和经络不通。组方:海桐皮15克,五加皮15克,续断片10克,桑寄生18克,当归12克,羌活5克,桂枝5克,木瓜6克,钩藤12克,红花5克,鸡血
期刊