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吸烟是牙周炎的重要危险因素，促进牙周炎发生和发展，影响牙周炎治疗和预后。本课题组前期研究在人和大鼠的牙周组织中发现烟碱型乙酰胆碱受体α7亚型（alpha7nicotinic acetylcholine receptor, α7nAChR）的功能性表达，为研究尼古丁在牙周炎发生发展中的作用开辟了新视野。核转录因子κB（Nuclear factor-kappa B, NF-κB）是免疫和炎症反应中的关键调节因子。牙周炎患者牙周组织中NF-κB的表达明显高于正常人牙周组织。本实验通过研究尼古丁、α-BTX及PDTC作用于人牙周膜细胞（Humanperiodontal ligament cells, hPDLCs）后NF-κB与α7nAChR的表达，进一步探索尼古丁激活α7nAChR后的信号机制及其在吸烟相关性牙周炎发生发展中的作用。实验一改良组织块法培养hPDLCs材料与方法：取1114岁儿童因正畸需要拔除的第一前磨牙，无菌条件下刮取根中1/3牙周膜组织，改良组织块法原代培养，常规传代，第5代细胞用于后续实验。结果：在37d内观察到组织周围有原代细胞爬出，常规传代后，镜下见细胞密度均匀，铺满瓶底，呈放射状排列，细胞呈长梭形，细胞浆均匀丰满，核仁圆形且清晰。结论：采用改良组织块法成功建立hPDLCs体外实验模型。实验二尼古丁和/或α-BTX对hPDLCs NF-κB活性与mRNA表达的影响材料与方法：以体外培养的hPDLCs为实验模型，通过PCR凝胶电泳实验检测α7nAChR激动剂尼古丁以不同浓度和时间作用于hPDLCs后NF-κB mRNA的表达。通过Western blot检测α7nAChR激动剂尼古丁(10-5M)和拮抗剂α-BTX(10-8M)作用下hPDLCs NF-κB亚基P65蛋白核内含量变化。结果：不同浓度和时间尼古丁作用于hPDLCs后，各组电泳图未见明显差异，灰度分析结果表明，各组NF-κB的mRNA表达与对照组相比差异无统计学意义。尼古丁(10-5M作用24h后，hPDLCs细胞核内P65蛋白含量明显增加，并且该作用可以被a-BTX(10-8M)抑制，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：尼古丁可促进hPDLCs NF-κB亚基P65蛋白的核内转移，该作用可以被α7nAChR拮抗剂a-BTX抑制，提示在hPDLCs中尼古丁可能通过α7nAChR调节NF-κB活性。本实验没有发现尼古丁影响NF-κB mRNA的表达。实验三尼古丁和/或α-BTX、PDTC对hPDLCs NF-κB活性和IL-1β、IL-8mRNA表达的影响材料与方法：通过Western blot检测α7nAChR激动剂尼古丁（10-5M）和NF-κB抑制剂PDTC(10-5M、3×10-5M、5×10-5M)作用hPDLCs后， NF-κB亚基P65蛋白核内含量变化。通过PCR凝胶电泳实验检测α7nAChR激动剂尼古丁(10-5M)、拮抗剂α-BTX(10-8M)和NF-κB抑制剂PDTC(5×10-5M)作用hPDLCs后IL-1β和IL-8mRNA表达变化。结果：尼古丁（10-5M）单独作用下hPDLCs核内P65蛋白含量较对照组升高。浓度梯度PDTC预先孵育30min后，P65蛋白含量随PDTC浓度增高而下降，PDTC浓度为5×10-5M时P65蛋白含量最低，与尼古丁作用组相比差异有统计学意义（P<0.01）。10-5M尼古丁作用下hPDLCs IL-1β和IL-8mRNA表达显著升高，较对照组差异有统计学意义，a-BTX及PDTC预作用30min后尼古丁的作用受到明显抑制，较尼古丁作用组差异有统计学意义（P <0.05）。结论：尼古丁可促进hPDLCs IL-1β、IL-8mRNA表达，NF-κB抑制剂PDTC可抑制P65蛋白核内转移及IL-1β、IL-8mRNA表达。结合前期实验结果，提示尼古丁作用于hPDLCs α7nAChR后，影响炎性因子IL-1β和IL-8分泌，转录因子NF-κB可能参与了尼古丁对牙周炎发生和发展的影响。