小菜蛾抗茚虫威生理机制及para通道基因片段克隆与表达特征

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十字花科蔬菜重要的食叶性害虫小菜蛾plutella xylostella(L.),已对50余种杀虫剂产生了不同程度的抗药性,究其原因多半是施药过度频繁,以及小菜蛾生活史比较特殊,因此又称之为抗药性研究的“模式害虫”。新型噁二嗪类杀虫剂茚虫威鉴于其作用机理的独特性、杀虫活力的卓越性和对非靶标生物的安全性,已成功替代有机磷和拟除虫菊酯类传统杀虫剂,也成为当前备受关注的焦点。本文把小菜蛾作为研究对象,着重研究和探讨了有关茚虫威的生理抗性机制及靶标抗性基因分子机制等毒理学问题。1.比较茚虫威相对敏感品系、汰选抗性品系和长沙田间品系小菜蛾幼虫体内保护酶活性发现,在没有接触药剂条件下,三个不同品系小菜蛾的超氧化物歧化酶、过氧化物酶及过氧化氢酶的活性不存在显著性差异;用它们各自的LC50剂量处理后中毒症状较轻的幼虫体内这三种保护酶活性明显升高;同时也发现茚虫威敏感和抗性品系小菜蛾幼虫在不同发育龄期的保护酶活性与虫龄呈正相关性。2.测定茚虫威对三个品系小菜蛾幼虫呼吸代谢的影响,结果显示汰选抗性品系和田间品系小菜蛾抗性水平的提高并不影响小菜蛾的本底呼吸速率,接触茚虫威后,伴随着药剂剂量的升高,中毒时间的延长,呼吸速率呈现先升后降的变化规律。呼吸速率变化幅度不仅与小菜蛾的解毒代谢能力有关,也与抗药性水平高低存在一定相关性。3.结合反转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和特异性上下游引物分别从茚虫威相对敏感和抗性品系小菜蛾4龄幼虫体内扩增出一段位于para内离子通道基因ⅡS4-S6的269bp cDNA片段。序列比对表明,小菜蛾相对敏感品系和抗性品系钠离子通道基因核苷酸和编码氨基酸的序列完全相同,没有出现基因突变。4.综合运用半定量RT-PCR和实时荧光定量PCR技术,定性和定量分析小菜蛾para钠离子通道基因的表达差异性,发现目的基因在小菜蛾不同发育时期和不同组织中均有表达,但相对表达量不同。小菜蛾整个发育阶段成虫期表达量最高,蛹期最低;同龄幼虫体内不同发育组织中相对表达量差异性不显著。
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