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背景:慢性根尖周炎（Chronic Apical Periodontitis,CAP）是以炎性肉芽组织的形成和根尖周骨组织的破坏为主要表现的疾病,是最常见的与牙齿相关的颌骨炎性病变,巨噬细胞、中性粒细胞、细胞因子和趋化因子都参与慢性根尖周炎形成并介由免疫反应和微生物感染引起根尖周骨组织破坏。近年的研究表明脾酪氨酸激酶（Spleen Tyrosine Kinase,Syk）是多种生物学功能的重要参与者,在血液系统恶性肿瘤、自身免疫性疾病和其他炎症相关疾病的治疗中发挥了重要作用。有研究表明,Syk可以调控牙周炎的骨吸收,Syk的特异性缺失减少了结扎诱导的牙周炎所致的牙槽骨吸收。但是,关于Syk在慢性根尖周炎中的作用研究尚未见报道。探究Syk在慢性根尖周炎中的作用及机制有助于进一步了解慢性根尖周炎的发病机理,为慢性根尖周炎的治疗提供依据。目的:本实验通过收集慢性根尖周炎患者的临床根尖周肉芽组织、建立小鼠慢性根尖周炎模型、构建脂多糖（LPS）介导下破骨细胞及成骨细胞中的炎症微环境,探究慢性根尖周炎中Syk的作用和机制。方法:1、Syk在慢性根尖周炎临床组织中的表达依据慢性根尖周炎组织纳入标准收集临床病例,样本收集经过大连医科大学口腔医学院附属口腔医院医学伦理委员会审批和患者知情同意。实验组为根尖手术或拔牙术切除或刮除的慢性根尖周肉芽组织30例,对照组为因正畸治疗拔除的健康双尖牙或健康无症状埋伏阻生的第三磨牙根尖周牙周膜组织30例。Real-Time qPCR检测实验组与对照组各15例样本Syk基因表达水平;IHC染色检测实验组与对照组各7例样本Syk蛋白表达水平;Western blot检测实验组与对照组各8例样本Syk蛋白表达水平。2、Syk在小鼠慢性根尖周炎模型中的表达经大连医科大学动物伦理委员会审批,随机选取C57BL/6J小鼠25只,实验组行下颌第一磨牙开髓术,术后将髓腔自然显露于口腔,创建小鼠慢性根尖周炎模型。0周组未进行开髓术为健康对照组,开髓后1周、2周、3周、4周组为根尖周炎实验组。制作冰冻切片,通过HE染色观察根尖周炎症进展过程中的病理变化,检验小鼠慢性根尖周炎模型是否成功构建形成,通过IHC染色检测Syk的表达与分布情况。3、LPS介导下,破骨细胞与成骨细胞中Syk、小眼畸形转录因子（MITF）及骨标志因子的表达（1）破骨细胞及成骨细胞的诱导与鉴定1)RANKL诱导液培养RAW264.7细胞5天后,通过显微镜观察、TRAP染色和Real-Time qPCR,鉴定RAW264.7细胞是否成功诱导为破骨细胞。2)成骨诱导液培养MC3T3-E1细胞7天后,通过ALP染色和Real-Time qPCR以及培养21天后通过茜素红染色,鉴定MC3T3-E1细胞是否成功诱导为成骨细胞。（2）LPS介导下,破骨细胞与成骨细胞中Syk、MITF及骨标志因子的表达1)LPS介导下,通过Real-Time qPCR和Western blot检测破骨细胞中Syk、MITF、TRAP和CTSK基因水平和蛋白水平表达。2)LPS介导下,通过Real-Time qPCR和Western blot检测成骨细胞中Syk、MITF、ALP和RUNX2基因水平和蛋白水平表达。（3）LPS介导下,下调Syk表达水平对破骨细胞与成骨细胞增殖和分化的影响1)进行瞬时转染,通过Real-Time qPCR和Western blot检验Syk-siRNA在破骨细胞及成骨细胞中的转染效率。2)通过CCK-8实验,检测下调Syk对破骨细胞和成骨细胞增殖活性的影响。3)通过Real-Time qPCR和Western blot,检测下调Syk表达水平后下游因子MITF表达情况以及破骨细胞中TRAP、CTSK和成骨细胞中ALP、RUNX2基因水平和蛋白水平表达。结果:1、Syk在慢性根尖周炎临床组织中的表达Real-Time qPCR、IHC染色和Western blot检测显示慢性根尖周炎临床组织中Syk的基因水平和蛋白水平表达高于健康牙周膜组织（p＜0.05）。年龄和性别与组织学差异间无统计学差异（p＞0.05）。2、Syk在小鼠慢性根尖周炎模型中的表达（1）HE染色HE染色结果显示下颌第一磨牙根尖周骨组织有不同程度的吸收,小鼠慢性根尖周炎模型构建成功。（2）IHC染色开髓后0周,根尖周骨组织中可见少许Syk阳性细胞;1周,根尖周区域Syk阳性细胞数量增加;2周,Syk阳性细胞数达到峰值;2周后,随着时间进展Syk阳性细胞数逐渐减少（p＜0.05）。3、LPS介导下,破骨细胞与成骨细胞中Syk、MITF及骨标志因子的表达（1）破骨细胞及成骨细胞的诱导和鉴定1)显微镜观察、TRAP染色和Real-Time qPCR检测显示RAW264.7细胞已诱导分化为破骨细胞。2)ALP染色、Real-Time qPCR和茜素红染色检测显示MC3T3-E1细胞已诱导分化为成骨细胞。（2）LPS介导下,破骨细胞与成骨细胞中Syk、MITF及骨标志因子的表达1)LPS介导下,Real-Time qPCR和Western blot检测结果表明Syk、MITF、TRAP、CTSK在破骨细胞中基因水平和蛋白水平表达升高（p＜0.05）。2)LPS介导下,Real-Time qPCR和Western blot检测结果表明Syk、MITF、ALP、RUNX2在成骨细胞中基因水平和蛋白水平表达降低（p＜0.05）。（3）LPS介导下,下调Syk表达水平对破骨细胞及成骨细胞增殖和分化的影响1)荧光显微观察可见siRNA转染进入细胞内。Real-Time qPCR和Western blot检测表明转染Syk-siRNA后Syk在基因水平和蛋白水平表达降低（p＜0.05）。2)CCK-8实验结果显示转染Syk-siRNA后抑制破骨细胞和成骨细胞的增殖活性（p＜0.05）。3)破骨细胞转染Syk-siRNA后,Real-Time qPCR和Western blot检测表明MITF、TRAP及CTSK基因水平和蛋白水平表达降低;成骨细胞转染Syk-siRNA后,MITF、ALP及RUNX2基因水平和蛋白水平表达升高（p＜0.05）。结论:1、Syk参与慢性根尖周炎的病变过程。2、在LPS介导的炎症环境中,Syk通过调控下游因子MITF以及成骨细胞和破骨细胞的增殖与分化,参与慢性根尖周炎骨破坏的发生发展。