NRG1的分子进化及其在不同烟草物种TMV抗性中的作用

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烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)与其抗性基因N基因相互作用是研究植物和病原菌间相互作用经典模型。N基因起源于烟草野生种Nicotiana glutinosa,编码TIR-NBS-LRR结构域。通过VIGS实验发现一个CC-NBS-LRR基因(N requirement gene1, NRG1)在N介导的抗TMV信号传导中起重要作用。本研究用PCR方法从茄科物种中扩增获得26条NRG1序列,并且从14个已测序基因组中鉴定出NRG1直系同源体序列。对茄科中NRGl同源体序列进行正选择位点分析,仅检验出4%的正选择位点。利用NRG1氨基酸序列构建的进化树与物种之间的进化关系基本一致。这两点说明NRGl的进化与其它抗病基因不同,其序列高度保守。本研究还利用VIGS方法分析了NRG1和几个信号传导关键基因在不同烟草TMV抗性中的作用。通过构建NRG1基因和已知抗病信号传导关键基因的VIGS载体,以抗TMV烟草为材料,再利用侵染TMV观察表型和RT-PCR方法鉴定目的基因沉默效果。结果表明在N. gossei中沉默信号传导基因RAR1,NDR1,PAD4,在N. alata沉默基因RAR1,PAD4和NRG1后,分别失去了对TMV的抗性。与N基因不同,N. alata中的TMV抗性基因对TMV复制酶中的解旋酶不产生过敏反应。以上结果表明NRG1不仅参与N介导的TMV抗性,也参与了N. alata的TMV抗性基因所介导的抗性途径。本研究还通过RNA干涉沉默NRG1基因,得到的N. repanda阳性苗通过RT-PCR方法检测成功沉默NRG1基因。NRG1在N. repandaTMV抗性中的作用在进一步研究之中
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