番茄花叶病毒外壳蛋白与烟草IP-L蛋白互作研究及水稻黑条矮缩病毒P9-1蛋白的结构和功能研究

来源 :中国科学院微生物研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pjlkj
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
本论文的研究内容主要包括两个部分:1)番茄花叶病毒外壳蛋白与烟草IP-L的相互作用研究;2)水稻黑条矮缩病毒P9-1的结构和功能研究。   先前利用酵母双杂交系统筛选到一个与番茄花叶病毒(ToMV)外壳蛋白(CP)相互作用的烟草蛋白,并命名为IP-L。初步研究表明该蛋白可能参与病毒的长距离运动。然而,IP-L的结构和功能及其与ToMV CP相互作用的分子机制仍不完全明了。本研究在原核系统里高效表达了IP-L并对其二级结构进行了研究,圆二色谱分析显示该蛋白主要由无规卷曲结构组成,该结果与用Markov chains方法预测的结果一致。用酵母双杂交和GST-Pulldown实验对IP-L和ToMV CP上二者相互作用位点进行了研究,结果表明二者依靠各自的α-螺旋区相互作用,IP-L N端的α-螺旋区域(1~20位氨基酸)为二者相互作用所必需,而ToMV CP中有2个α-螺旋区域(16~31位氨基酸、138~149位氨基酸)参与二者的相互作用。进一步的定点突变分析表明IPL中L9A、H12G和ToMV CP中N26A、T29A、N30A、N143A和T144A等突变会导致二者失去相互作用能力。为初步了解IP-L的功能,克隆了其启动子序列并进行了生物信息学分析,发现该序列除含有TATA盒和CAAT盒等基本顺式元件外,还含有若干光应答元件(LREs),这表明IP-L的功能可能与烟草光合作用有关。随后利用免疫印迹技术证实IP-L定位于烟草叶肉细胞中叶绿体的类囊体上,该结果与对启动子序列分析所得的结论一致。为初步了解IP-L及其与ToMV CP的相互作用在病毒感染中的作用,利用农杆菌介导的叶盘法获得了IP-L沉默和过表达的转基因烟草植株。攻毒实验表明在IP-L沉默的烟草植株中典型的花叶症状要延迟3-5天出现,且体内ToMV CP的积累水平要明显低于野生型和IP-L过表达的烟草植株。这些结果表明IP-L与ToMV CP的相互作用有利于后者在烟草叶绿体中的积累,并进而通过干扰叶绿体的功能和稳定性来促进花叶症状的发展。   呼肠孤病毒的复制和组装通常发生在寄主细胞质内的包含体中,这些包含体也被称为“病毒工厂”或病毒基质。水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)P9-1为一非结构蛋白,定位于染病植物和昆虫寄主细胞内的基质中。但是该蛋白在RBSDV侵染过程中的具体功能尚不清楚。本论文的第二部分即是对RBSDV P9-1的结构和功能的研究。首先克隆到RBSDV保定株的S9-1全长,并利用原核表达系统获得了P9-1的高纯蛋白,随后利用一系列生物物理、生物化学方法对其进行了分析。质谱和圆二色谱分析表明P9-1是一分子量为41.8 kDa的α螺旋结构蛋白,在磷酸缓冲液中高度稳定,Tm值达到75℃。凝胶过滤层析、酵母双杂交和化学交联实验表明P9-1能自身相互作用形成稳定的同型二聚体。此外,利用原生质体瞬时表达系统证实P9-1能在体内形成基质样物质。这些结果表明P9-1对RBSDV的早期感染十分重要,可在体内形成病毒基质,为病毒复制提供场所。
其他文献
生态承载力是衡量人类经济社会活动与自然环境之间相互关系的科学概念,是人类可持续发展度量和管理决策的依据,也是当前生态学研究的热点、难点和理论前沿。本文以生态承载力为
学位
广州地区有标本记载的野生种子植物177科777属1817种。基于此名录,本论文对广州地区种子植物区系的地理成分及历史成分进行了探讨。同时,以花都王子山地区森林群落为代表,分析了
本论文主要应用溶液核磁共振方法研究金黄色葡萄球菌核酸酶E43S突变体与DNA的相互作用以及金黄色葡萄球菌核酸酶1-110片段的折叠特性。第一章综述部分详细介绍了15N核磁共振
学位
折叠波导行波管是一种微波功率放大源,具有宽频带、大功率和易加工的优势,在电子对抗、卫星通信以及雷达等电子设备中具有广阔的应用前景。近些年来,折叠波导行波管在太赫兹领域
随着城市化进程的加快,城市活动对碳氮循环的影响愈加显著,城市生态系统碳氮代谢的失调成为城市环境污染问题的主要原因。研究城市活动的碳氮排放特征及其影响因素,可为了解城市
学位
乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤,随着人民生活生活方式的变化,我国乳腺癌的发病率增长迅速。早期发现、早期诊断及早期治疗是乳腺癌防治、延长患者存活期的唯一有效的方法。经过
什么样的课堂才能被称之为“高效”?这确实是个需要认认真真深入思考的问题。对于高效的理解可能因为不同教学流派、不同的教育理论、不同的认知形式、不同的课程、s不同的课
理论计算和实验测量均表明,目标在高频区的散射场可由目标上局部散射源的散射场矢量合成获得,这些局部散射源称为目标等效散射中心或目标散射中心,目标散射中心是目标在高频区散
本论文主要围绕以天然产物新肉球菌素(Neoengleromycin)为模板,合成了其类似物并进行了体外抗肿瘤活性的筛选工作。设计并合成了光学纯手性叔醇分子,运用量子力学和自创矩阵模
学位
学位