Let-7a-3p靶向CXCR4调控A549细胞侵袭迁移能力的研究

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目的:CXCL12/CXCR4信号轴在恶性肿瘤的转移中发挥重要作用。Let-7a-3p在肺癌组织中低表达,报告基因分析发现CXCR4可能是其靶基因。本研究拟证实let-7a-3p在A549细胞中可靶向调控CXCR4表达,并影响A549细胞侵袭迁移能力。方法:(1)qRT-PCR检测A549细胞株中let-7a-3p和CXCR4 mRNA水平的表达变化。(2)转染let-7a-3p mimic、inhibitor至A549细胞株中,检测CXCR4 mRNA及蛋白水平的表达变化。(3)荧光素酶报告基因验证let-7a-3p与CXCR4 3,-UTR是否靶向结合。(4)转染高表达质粒和siRNA至A549细胞中上调和下调CXCR4的表达,Transwell实验分析其对A549细胞侵袭迁移能力的影响,并检测相关MMPs mRNA水平变化,Western Blot分析相关蛋白水平的变化。(5)转染let-7a-3p mimic、inhibitor至A549细胞中,检测MMPs mRNA及蛋白水平变化,并分析其对A549细胞侵袭迁移能力的影响。结果:(1)在A549细胞中,let-7a-3p呈低表达,CXCR4高表达。(2)let-7a-3p可负调控CXCR4的表达。(3)成功构建含有CXCR4 3,-UTR的荧光素酶报告基因质粒,证实let-7a-3p可与CXCR4 3,-UTR靶向结合。(4)CXCR4过表达能够促进A549细胞侵袭迁移,并上调MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白水平的表达;而低表达CXCR4则结果表现相反。(5)let-7a-3p可通过负调控CXCR4表达,以及下调MMP-2、MMP-9的表达水平的,抑制A549细胞侵袭迁移的能力。结论:Let-7a-3p通过靶向CXCR4和下调MMP-2、MMP-9的表达,从而抑制A549细胞的侵袭迁移。
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