LPS及TOLL样受体4阻断剂对蜕膜细胞中PR及IL-1β、COX-2影响的研究

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目的:旨在研究脂多糖(LPS)及其拮抗剂TOLL样受体4阻断剂(TLR4mAb)作用于体外培养的蜕膜细胞后孕激素受体(PR)、 IL-1β及COX-2的表达情况,以探讨脂多糖及其拮抗剂对蜕膜细胞中孕激素受体的影响,和孕激素受体与炎症因子之间的关系。方法:分离培养人早孕蜕膜细胞,当细胞传代至3-4代时,采用HE染色观察细胞形态、免疫荧光技术鉴别细胞纯度,将蜕膜细胞随机分为6组:分别用0ug/ml、1ug/ml和3ug/ml终浓度TLR4mAb各2孔预处理细胞24小时,再用Ong/ml、100ng/ml LPS分别加入三组TLR4mAb中作用24小时。用MTT技术检测细胞存活及生长率、RT-PCR半定量技术,检测PR、 IL-1β及COX-2mRNA的表达变化。结果:1.免疫荧光示,蜕膜细胞传到3-4代时体积较第一代增大,胞核更明显且纯度更高,镜下形态一致性高。2.MTT实验示,与对照组比较LPS抑制细胞生长(P<0.05);TLR4mAb促进细胞增殖,且一定浓度的TLR4mAb能够在一定程度上拮抗LPS对细胞生长的抑制作用(P>0.05),无统计学意义。3.RT-PCR实验示:(1)LPS使蜕膜细胞中PR mRNA的表达下调(P<0.05),使IL-1β和COX-2mRNA的表达上调(P<0.05);(2)TLR4mAb使蜕膜细胞中PR和COX-2mRNA的表达无统计学意义(P>0.05),使IL-1β mRNA的表达下调(P<0.05);(3)TLR4mAb则使LPS作用后的蜕膜细胞中PR mRNA的表达上调(P<0.05)、 IL-1βmRNA的表达下调(P<0.05);高浓度TLR4mAb使COX-2mRNA的表达下调(P<0.05)。结论:LPS作用于体外培养的人蜕膜细胞后, PR mRNA表达下调;IL-1β、 COX-2的1mRNA表达增加;使用TOLL样受体4阻断剂后能拮抗LPS对蜕膜细胞中IL-1β、 COX-2的作用。
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