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’海沃德’猕猴桃抗坏血酸(AsA,也称Vc)含量较高,AsA是衡量猕猴桃营养品质的重要指标,然而AsA在猕猴桃采后贮藏中损失率较高,降低了猕猴桃的营养价值,但其AsA降解的机理鲜有报道。本试验采用高通量测序技术对’海沃德’猕猴桃果实后熟期第1天(DAP1,采收当天)、第15天(DAP15,乙烯释放高峰)和第24天(DAP24,乙烯0释放)三个时期进行转录组测序:获得了’海沃德’猕猴桃后熟期间三个转录本的数据,得到AsA降解通路中差异表达基因。同时,根据差异表达基因的表达量和差异倍数,分析了 AsA降解过程中10个抗坏血酸氧化酶(AO)基因和6个漆酶(Laccase)基因,对16个基因结构通过分子系统进化分析,最后对16个候选基因采用荧光定量PCR的方法验证,测定了 AsA含量的变化及降解相关酶活性的变化,这些研究为开发控制AsA降解的猕猴桃贮藏保鲜新技术提供理论依据。主要研究结果如下:1.对转录组测序分析共获得了平均4.43 Gb数据的三个转录本,新转录本有21,307个,其中有19,392个编码的转录组,新基因有4,512个。共有7,090个差异表达基因被注释到114条KEGG 生物通路分类中。在 DAP1 VS DAP15、DAP1 VS DAP24 和 DAP15 VS DAP24对比中表示上调和下调的差异表达基因分别有2,829、1,728、336和5,378、9,668、4,531个。五大激素脱落酸、赤霉素、细胞分裂素、生长素和乙烯的信号传导通路中上调的差异表达基因分别有9、6、6、7和8个,下调的差异表达基因分别有9、8、10、11和11个。2.AsA降解通路关键基因表达差异分析’海沃德’猕猴桃后熟期DAP1与DAP15,DAP1与DAP24和DAP15与DAP24的比对中,发现AsA降解通路中表达上调的基因分别有12、6和1个,表达下调的基因分别有8、13和8个,发现在猕猴桃后熟的中后期表达量下调的基因比上调的基因多。3.AsA降解通路基因表达差异的荧光定量PCR验证采用荧光定量PCR的方法验证了’海沃德’猕猴桃果实后熟期AsA降解通路关键酶AO酶基因家族中10个和Laccase酶基因家族中6个成员的表达差异。结果表明:15个基因的表达变化趋势与高通量测序结果一致,表明测序质量高,结果可靠。其中AO酶基因家族成员Achn059971和Achn020161在后熟期的中、后期显著上调(p<0.01),DAP15和DAP24表达量分别为15.49和22.36,13.18和19.13。Laccase酶基因家族成员Achn007661和Achn191341在后熟期的中、后期显著上调(p<0.01),在 DAP15 和 DAP24 表达量分别为 12.23、30.25 和 14.15、29.37。4.AsA降解关键酶AO酶及Laccase酶活性变化研究了20℃的条件下’海沃德’果实AsA含量、AO和Laccase酶活的变化,结果表明:AsA的含量在后熟的过程中呈下降的趋势,在20℃后熟25天后,AsA的含量由70.7mg/100g降低至32.74mg/100g,降解率为53.7%。AO酶活DAP1活性为2.84U/g FW,DAP15活性为2.74U/g FW,DAP25天活性反而极显著下降下降为 1.53U/gFW(p<0.01)。Laccase 酶活 DAP1 的活性为 0,第 DAP15 活性为 48.4 U/L,差异极显著(p<0.01),DAP25活性为29.6,差异极显著(p<0.01)。